山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2011年
6期
443-446
,共4页
王晓捷%尹强兵%马晓姣%邹飞%陈雪梅
王曉捷%尹彊兵%馬曉姣%鄒飛%陳雪梅
왕효첩%윤강병%마효교%추비%진설매
HSP90%RNA干扰%HepG2细胞
HSP90%RNA榦擾%HepG2細胞
HSP90%RNA간우%HepG2세포
目的 用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对人肝癌HepG2细胞生物学行为的影响.方法 将人HSP90α RNA干扰基因片段连接入pSilencer 2.1-U6 neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴定后,用电穿孔法转染到人肝癌细胞系HepG2细胞内.经G418筛选后,阳性克隆被进一步分离培养,形成稳定的HSP90α抑制表达细胞株.将此细胞株作为siRNA干扰组,将未转染的HepG2细胞作为对照组.用荧光定量PCR,免疫印迹检测siRNA对HSP90α的抑制效果,采用CCK-8法测定其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.结果 测序表明HSP90α干扰序列完全正确;siRNA干扰组HSP90α mRNA水平降低,蛋白表达量也有明显的减少;与对照组相比,siRNA干扰组在48 h后可明显抑制细胞增殖,流式细胞术检测siRNA干扰组细胞有明显的G2/M期细胞周期阻滞.结论 建立稳定低表达HSP90α的HepG2细胞株;下调HepG2细胞内HSP90α的基因表达可抑制细胞增殖,引起明显的细胞周期阻滞.HSP90α靶向siRNA干扰为肝癌的基因治疗提供了可能.
目的 用RNA榦擾方法建立穩定的熱休剋蛋白90α(HSP90α)抑製錶達細胞株,研究熱休剋蛋白90α抑製錶達對人肝癌HepG2細胞生物學行為的影響.方法 將人HSP90α RNA榦擾基因片段連接入pSilencer 2.1-U6 neo載體,重組質粒pSilencerHSP90經亞剋隆、純化、測序鑒定後,用電穿孔法轉染到人肝癌細胞繫HepG2細胞內.經G418篩選後,暘性剋隆被進一步分離培養,形成穩定的HSP90α抑製錶達細胞株.將此細胞株作為siRNA榦擾組,將未轉染的HepG2細胞作為對照組.用熒光定量PCR,免疫印跡檢測siRNA對HSP90α的抑製效果,採用CCK-8法測定其對細胞增殖的影響,流式細胞儀檢測其對細胞週期的影響.結果 測序錶明HSP90α榦擾序列完全正確;siRNA榦擾組HSP90α mRNA水平降低,蛋白錶達量也有明顯的減少;與對照組相比,siRNA榦擾組在48 h後可明顯抑製細胞增殖,流式細胞術檢測siRNA榦擾組細胞有明顯的G2/M期細胞週期阻滯.結論 建立穩定低錶達HSP90α的HepG2細胞株;下調HepG2細胞內HSP90α的基因錶達可抑製細胞增殖,引起明顯的細胞週期阻滯.HSP90α靶嚮siRNA榦擾為肝癌的基因治療提供瞭可能.
목적 용RNA간우방법건립은정적열휴극단백90α(HSP90α)억제표체세포주,연구열휴극단백90α억제표체대인간암HepG2세포생물학행위적영향.방법 장인HSP90α RNA간우기인편단련접입pSilencer 2.1-U6 neo재체,중조질립pSilencerHSP90경아극륭、순화、측서감정후,용전천공법전염도인간암세포계HepG2세포내.경G418사선후,양성극륭피진일보분리배양,형성은정적HSP90α억제표체세포주.장차세포주작위siRNA간우조,장미전염적HepG2세포작위대조조.용형광정량PCR,면역인적검측siRNA대HSP90α적억제효과,채용CCK-8법측정기대세포증식적영향,류식세포의검측기대세포주기적영향.결과 측서표명HSP90α간우서렬완전정학;siRNA간우조HSP90α mRNA수평강저,단백표체량야유명현적감소;여대조조상비,siRNA간우조재48 h후가명현억제세포증식,류식세포술검측siRNA간우조세포유명현적G2/M기세포주기조체.결론 건립은정저표체HSP90α적HepG2세포주;하조HepG2세포내HSP90α적기인표체가억제세포증식,인기명현적세포주기조체.HSP90α파향siRNA간우위간암적기인치료제공료가능.
