中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2011年
5期
388-393
,共6页
闫小艳%高会洲%冯吉利%杨霞%杨科武
閆小豔%高會洲%馮吉利%楊霞%楊科武
염소염%고회주%풍길리%양하%양과무
金属β-内酰胺酶L1%金属酶重组%光谱表征%β-内酰胺类抗生素%酶催化动力学
金屬β-內酰胺酶L1%金屬酶重組%光譜錶徵%β-內酰胺類抗生素%酶催化動力學
금속β-내선알매L1%금속매중조%광보표정%β-내선알류항생소%매최화동역학
目的 表征金属β-内酰胺酶(MBL)L1的结构和动力学特性,以其发展MBL的通用型抑制剂.方法 在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达并纯化野生型L1(Wild type L1,WT-L1),以SDS-PAGE电泳确认;用EDTA除去WT-L1中的Zn(Ⅱ)离子得Apo-L1,再用Co(Ⅱ)滴定制得Co(Ⅱ)-L1;通过UV-vis,CD及荧光光谱表征WT-L1及Co(Ⅱ)-L1活性中心的结构;采用稳态动力学方法测定WT-L1及Co(Ⅱ)-L1催化3类9种β-内酰胺类抗生素水解反应的酶动力学参数,确定抗生素对L1的稳定性.结果 获得纯化的WT-L1和重组的Co(Ⅱ)-L1;光谱表征表明L1具有两个金属活性中心,Co(Ⅱ)-L1的二级结构发生显著变化;WT-L1对碳青霉烯类抗生素的酶促活性最强,青霉素类次之,头孢类抗生素较弱,Co(Ⅱ)-L1比WT-L1的酶催活性弱.结论 Co(Ⅱ)-L1的重组实现了对MBL-L1的结构表征,L1对青霉素类抗生素呈现强的催化活性,对头孢类抗生素稳定.
目的 錶徵金屬β-內酰胺酶(MBL)L1的結構和動力學特性,以其髮展MBL的通用型抑製劑.方法 在大腸埃希菌BL21(DE3)中錶達併純化野生型L1(Wild type L1,WT-L1),以SDS-PAGE電泳確認;用EDTA除去WT-L1中的Zn(Ⅱ)離子得Apo-L1,再用Co(Ⅱ)滴定製得Co(Ⅱ)-L1;通過UV-vis,CD及熒光光譜錶徵WT-L1及Co(Ⅱ)-L1活性中心的結構;採用穩態動力學方法測定WT-L1及Co(Ⅱ)-L1催化3類9種β-內酰胺類抗生素水解反應的酶動力學參數,確定抗生素對L1的穩定性.結果 穫得純化的WT-L1和重組的Co(Ⅱ)-L1;光譜錶徵錶明L1具有兩箇金屬活性中心,Co(Ⅱ)-L1的二級結構髮生顯著變化;WT-L1對碳青黴烯類抗生素的酶促活性最彊,青黴素類次之,頭孢類抗生素較弱,Co(Ⅱ)-L1比WT-L1的酶催活性弱.結論 Co(Ⅱ)-L1的重組實現瞭對MBL-L1的結構錶徵,L1對青黴素類抗生素呈現彊的催化活性,對頭孢類抗生素穩定.
목적 표정금속β-내선알매(MBL)L1적결구화동역학특성,이기발전MBL적통용형억제제.방법 재대장애희균BL21(DE3)중표체병순화야생형L1(Wild type L1,WT-L1),이SDS-PAGE전영학인;용EDTA제거WT-L1중적Zn(Ⅱ)리자득Apo-L1,재용Co(Ⅱ)적정제득Co(Ⅱ)-L1;통과UV-vis,CD급형광광보표정WT-L1급Co(Ⅱ)-L1활성중심적결구;채용은태동역학방법측정WT-L1급Co(Ⅱ)-L1최화3류9충β-내선알류항생소수해반응적매동역학삼수,학정항생소대L1적은정성.결과 획득순화적WT-L1화중조적Co(Ⅱ)-L1;광보표정표명L1구유량개금속활성중심,Co(Ⅱ)-L1적이급결구발생현저변화;WT-L1대탄청매희류항생소적매촉활성최강,청매소류차지,두포류항생소교약,Co(Ⅱ)-L1비WT-L1적매최활성약.결론 Co(Ⅱ)-L1적중조실현료대MBL-L1적결구표정,L1대청매소류항생소정현강적최화활성,대두포류항생소은정.
