西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2011年
8期
1512-1516
,共5页
吕山花%樊颖伦%张文会%刘立科
呂山花%樊穎倫%張文會%劉立科
려산화%번영륜%장문회%류립과
桃蚜%乙酰胆碱酯酶%MpAChE%RNAi载体构建%转化拟南芥
桃蚜%乙酰膽堿酯酶%MpAChE%RNAi載體構建%轉化擬南芥
도아%을선담감지매%MpAChE%RNAi재체구건%전화의남개
通过害虫取食植物表达害虫发育关键基因dsRNA的转基因植株,分析能否通过抑制害虫特定基因的表达来防控害虫.本研究利用RT-PCR技术从桃蚜中克隆乙酰胆碱酯酶基因383 bp cDNA片段,命名为MpAChE.进一步利用该MpAChE基因片段构建植物RNAi表达载体RNAi-MpAChE,并通过浸花法转化野生型拟南芥,通过卡那霉素抗性筛选转化植株,PCR及Southern杂交进一步鉴定转基因植株.结果表明:克隆的cDNA片段与桃蚜中已克隆的乙酰胆碱酯酶(GenBank登录号AY147797)cDNA序列核苷酸一致性为99％.卡那霉素抗性初步筛选和PCR进一步鉴定,获得25株阳性转基因植株.从25株中随机选择的5株阳性植株,Southern杂交均为阳性.经接种桃蚜初步鉴定,转基因植株对蚜虫的抗性效果不显著.
通過害蟲取食植物錶達害蟲髮育關鍵基因dsRNA的轉基因植株,分析能否通過抑製害蟲特定基因的錶達來防控害蟲.本研究利用RT-PCR技術從桃蚜中剋隆乙酰膽堿酯酶基因383 bp cDNA片段,命名為MpAChE.進一步利用該MpAChE基因片段構建植物RNAi錶達載體RNAi-MpAChE,併通過浸花法轉化野生型擬南芥,通過卡那黴素抗性篩選轉化植株,PCR及Southern雜交進一步鑒定轉基因植株.結果錶明:剋隆的cDNA片段與桃蚜中已剋隆的乙酰膽堿酯酶(GenBank登錄號AY147797)cDNA序列覈苷痠一緻性為99％.卡那黴素抗性初步篩選和PCR進一步鑒定,穫得25株暘性轉基因植株.從25株中隨機選擇的5株暘性植株,Southern雜交均為暘性.經接種桃蚜初步鑒定,轉基因植株對蚜蟲的抗性效果不顯著.
통과해충취식식물표체해충발육관건기인dsRNA적전기인식주,분석능부통과억제해충특정기인적표체래방공해충.본연구이용RT-PCR기술종도아중극륭을선담감지매기인383 bp cDNA편단,명명위MpAChE.진일보이용해MpAChE기인편단구건식물RNAi표체재체RNAi-MpAChE,병통과침화법전화야생형의남개,통과잡나매소항성사선전화식주,PCR급Southern잡교진일보감정전기인식주.결과표명:극륭적cDNA편단여도아중이극륭적을선담감지매(GenBank등록호AY147797)cDNA서렬핵감산일치성위99％.잡나매소항성초보사선화PCR진일보감정,획득25주양성전기인식주.종25주중수궤선택적5주양성식주,Southern잡교균위양성.경접충도아초보감정,전기인식주대아충적항성효과불현저.
