中国食品卫生杂志
中國食品衛生雜誌
중국식품위생잡지
2005年
2期
140-144
,共5页
杨立桃%赵志辉%丁嘉羽%张承妹%贾军伟%张大兵
楊立桃%趙誌輝%丁嘉羽%張承妹%賈軍偉%張大兵
양립도%조지휘%정가우%장승매%가군위%장대병
植物,转基因%稻(米)%聚合酶链反应%基因剂量
植物,轉基因%稻(米)%聚閤酶鏈反應%基因劑量
식물,전기인%도(미)%취합매련반응%기인제량
为分析转基因水稻外源基因拷贝数,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析.转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得.定量分析了14株T0代的转基因水稻植株,得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株,同时利用Southern Blot方法进行验证分析.随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株,用Southem Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数,Southem Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southem Blot的分析结果,主要原因是Southern B10t方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段,电泳分析时很难分辨清楚.定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂.两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用.
為分析轉基因水稻外源基因拷貝數,利用新型、靈敏、高通量的實時熒光定量PCR方法進行轉基因水稻外源基因拷貝數的分析.轉基因外源基因的拷貝數通過轉基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻內標準SPS基因含量的比較計算穫得.定量分析瞭14株T0代的轉基因水稻植株,得到瞭外源基因插入分彆為1、2、3和4的轉基因植株,同時利用Southern Blot方法進行驗證分析.隨機選擇18箇已經過定量PCR檢測分析的轉基因水稻植株,用Southem Blot的方法分析轉基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷貝數,Southem Blot分析結果顯示有15箇轉基因水稻植株的分析結果與定量PCR分析的結果是一緻的,3箇植株定量PCR分析的轉基因拷貝數稍高于Southem Blot的分析結果,主要原因是Southern B10t方法在同一箇插入位點有多拷貝的T-DNA片段插入時,轉基因植株的基因組在完全酶切時會產生相似的DNA片段,電泳分析時很難分辨清楚.定量PCR方法則完全避免瞭這種情況的髮生,除非目的基因DNA片段在PCR引物處髮生斷裂.兩種方法分析結果的比較顯示定量PCR方法分析轉基因拷貝數更加有效、適用.
위분석전기인수도외원기인고패수,이용신형、령민、고통량적실시형광정량PCR방법진행전기인수도외원기인고패수적분석.전기인외원기인적고패수통과전기인수도외원기인(GUS화HPT기인)화수도내표준SPS기인함량적비교계산획득.정량분석료14주T0대적전기인수도식주,득도료외원기인삽입분별위1、2、3화4적전기인식주,동시이용Southern Blot방법진행험증분석.수궤선택18개이경과정량PCR검측분석적전기인수도식주,용Southem Blot적방법분석전기인수도식주중적HPT혹GUS기인적고패수,Southem Blot분석결과현시유15개전기인수도식주적분석결과여정량PCR분석적결과시일치적,3개식주정량PCR분석적전기인고패수초고우Southem Blot적분석결과,주요원인시Southern B10t방법재동일개삽입위점유다고패적T-DNA편단삽입시,전기인식주적기인조재완전매절시회산생상사적DNA편단,전영분석시흔난분변청초.정량PCR방법칙완전피면료저충정황적발생,제비목적기인DNA편단재PCR인물처발생단렬.량충방법분석결과적비교현시정량PCR방법분석전기인고패수경가유효、괄용.
