中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2008年
3期
299-302
,共4页
王海东%王占祥%马永会%谭国伟%骆启聪%程鹏
王海東%王佔祥%馬永會%譚國偉%駱啟聰%程鵬
왕해동%왕점상%마영회%담국위%락계총%정붕
pygo2基因C6细胞%载体%真核表达%wnt信号
pygo2基因C6細胞%載體%真覈錶達%wnt信號
pygo2기인C6세포%재체%진핵표체%wnt신호
目的 构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达.方法 从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的 片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5a,LB平板筛选菌落,提取质粒.重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达.结果 重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRI,HindⅢ酶切分析及测序检查,表明真核表达载体构建正确;瞬时转染C6细胞后,免疫细胞荧光染色及蛋白印迹检测表明转染细胞能够表达外源Pygo2基因.结论 成功构建了pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并能够在真核细胞中进行表达,这为今后研究pygo2基因在胶质瘤中的作用机制奠定了基础.
目的 構建pcDNA3.1-flag-pygo2真覈錶達載體併在C6細胞中進行錶達.方法 從小鼠腦膠質細胞中提取總RNA,RT-PCR法反轉錄閤成c DNA,設計引物,調取目的 片段,與pcDNA3.1-flag載體連接後轉化大腸桿菌DH5a,LB平闆篩選菌落,提取質粒.重組質粒pcDNA 3.1-flag-pygo2經過酶切鑒定及測序後,暘離子脂質體法轉染C6細胞併經免疫細胞化學染色及蛋白印跡檢測重組體的錶達.結果 重構質粒pcDNA 3.1-flag-pygo2經限製性覈痠內切酶EcoRI,HindⅢ酶切分析及測序檢查,錶明真覈錶達載體構建正確;瞬時轉染C6細胞後,免疫細胞熒光染色及蛋白印跡檢測錶明轉染細胞能夠錶達外源Pygo2基因.結論 成功構建瞭pcDNA3.1-flag-pygo2真覈錶達載體併能夠在真覈細胞中進行錶達,這為今後研究pygo2基因在膠質瘤中的作用機製奠定瞭基礎.
목적 구건pcDNA3.1-flag-pygo2진핵표체재체병재C6세포중진행표체.방법 종소서뇌효질세포중제취총RNA,RT-PCR법반전록합성c DNA,설계인물,조취목적 편단,여pcDNA3.1-flag재체련접후전화대장간균DH5a,LB평판사선균락,제취질립.중조질립pcDNA 3.1-flag-pygo2경과매절감정급측서후,양리자지질체법전염C6세포병경면역세포화학염색급단백인적검측중조체적표체.결과 중구질립pcDNA 3.1-flag-pygo2경한제성핵산내절매EcoRI,HindⅢ매절분석급측서검사,표명진핵표체재체구건정학;순시전염C6세포후,면역세포형광염색급단백인적검측표명전염세포능구표체외원Pygo2기인.결론 성공구건료pcDNA3.1-flag-pygo2진핵표체재체병능구재진핵세포중진행표체,저위금후연구pygo2기인재효질류중적작용궤제전정료기출.
