天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2008年
7期
486-488,后插1
,共4页
张绍敏%毋中明%宋丹%李兰英%于德民
張紹敏%毌中明%宋丹%李蘭英%于德民
장소민%무중명%송단%리란영%우덕민
遗传载体%绿色荧光蛋白质类%仓鼠%卵巢%转染
遺傳載體%綠色熒光蛋白質類%倉鼠%卵巢%轉染
유전재체%록색형광단백질류%창서%란소%전염
目的:构建并转染含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB(rhPDGF-BB)非融合型表达载体,为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础.方法:从人脐静脉内皮细胞(human umbil ical vein endotllelial cell,HUVEC)中分离总RNA,行RT-PCR获得rhPDGF-BB cDNA,构建克隆质粒pMD 19-T/rhPDGF-BB,经测序正确后,再将该目的片段与真核表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs连接,转化E.coli DH 5a感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体,然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)并用免疫组化染色法鉴定.结果:PCR获得长度为681 bp的目的片段,经pSELECT-GFPzeo-mcs载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配.结论:成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达.
目的:構建併轉染含綠色熒光蛋白(GFP)報告基因的重組人血小闆衍化生長因子-BB(rhPDGF-BB)非融閤型錶達載體,為採用轉基因工程化細胞脩複糖尿病潰瘍創麵奠定基礎.方法:從人臍靜脈內皮細胞(human umbil ical vein endotllelial cell,HUVEC)中分離總RNA,行RT-PCR穫得rhPDGF-BB cDNA,構建剋隆質粒pMD 19-T/rhPDGF-BB,經測序正確後,再將該目的片段與真覈錶達載體pSELECT-GFPzeo-mcs連接,轉化E.coli DH 5a感受態菌落篩選得到含GFP報告基因的非融閤型錶達載體,然後將其轉染中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)併用免疫組化染色法鑒定.結果:PCR穫得長度為681 bp的目的片段,經pSELECT-GFPzeo-mcs載體連接、篩選及序列分析後,證實所插入目的片段與GenBank檢索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配.結論:成功構建瞭非融閤型錶達載體pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,併實現瞭rhPDGF-BB基因在CHO的錶達.
목적:구건병전염함록색형광단백(GFP)보고기인적중조인혈소판연화생장인자-BB(rhPDGF-BB)비융합형표체재체,위채용전기인공정화세포수복당뇨병궤양창면전정기출.방법:종인제정맥내피세포(human umbil ical vein endotllelial cell,HUVEC)중분리총RNA,행RT-PCR획득rhPDGF-BB cDNA,구건극륭질립pMD 19-T/rhPDGF-BB,경측서정학후,재장해목적편단여진핵표체재체pSELECT-GFPzeo-mcs련접,전화E.coli DH 5a감수태균락사선득도함GFP보고기인적비융합형표체재체,연후장기전염중국창서란소세포(CHO세포)병용면역조화염색법감정.결과:PCR획득장도위681 bp적목적편단,경pSELECT-GFPzeo-mcs재체련접、사선급서렬분석후,증실소삽입목적편단여GenBank검색적rhPDGF-BB cDNA서렬(NM-033016)완전필배.결론:성공구건료비융합형표체재체pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,병실현료rhPDGF-BB기인재CHO적표체.
