中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
4期
340-345
,共6页
韩飞%杨致邦%郭丽媛%范贵荣
韓飛%楊緻邦%郭麗媛%範貴榮
한비%양치방%곽려원%범귀영
幽门螺杆菌%hp1188基因%表达%免疫原性%体内试验
幽門螺桿菌%hp1188基因%錶達%免疫原性%體內試驗
유문라간균%hp1188기인%표체%면역원성%체내시험
目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性.通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用.方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价.纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori 培养;H.pylori 定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori 感染的免疫保护作用.结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30 kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0 mg/ml.Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16.预防组H.pylori 感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P＜0.05).预防组不仅可以降低H.pylori 的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应.结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori 的定植.
目的:構建高效錶達Hp1188重組蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提純重組蛋白,鑒定其抗原性和免疫原性.通過小鼠灌胃試驗,驗證Hp1188蛋白阻止幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃內定植的作用.方法:構建重組質粒pQE30-hp1188,DNA測序分析正確後,轉化大腸桿菌DH5α,IPTG誘導錶達.錶達蛋白用Ni2+-NTA樹脂純化,SDS-PAGE分析純度,Bradford法測定濃度,Western blot鑒定對相應抗原的特異性,雙嚮瓊脂擴散實驗檢測效價.純化重組蛋白和粘膜佐劑霍亂毒素B亞單位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混閤液灌胃免疫接種預防組BALB/c小鼠,同時設陰性對照組和暘性對照組,免疫4週後用H.pylori NCTC 11637攻擊3次,末次攻擊4週後處死小鼠,進行胃組織H.pylori 培養;H.pylori 定植半定量、炎癥程度及其炎癥活動度的評分,以評價重組蛋白對胃組織H.pylori 感染的免疫保護作用.結果:構建的重組錶達質粒pQE30-hp1188經DNA測序證實序列完整,插入的基因片段全長810 bp,與基因文庫中的hp1188基因同源性達98%,併在大腸桿菌DH5α中錶達齣分子量約為30 kD大小的可溶性目的蛋白,錶達量佔全菌總量的47%,錶達蛋白純化後純度達90%,濃度為1.0 mg/ml.Western blot證實有良好抗原結閤特異性,雙嚮瓊脂擴散效價為1∶16.預防組H.pylori 感染率、定植及炎癥程度評分均明顯低于暘性對照組(P＜0.05).預防組不僅可以降低H.pylori 的定植,而且能減輕H.pylori造成的小鼠胃組織的跼部慢性炎癥反應.結論:成功構建瞭基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,併高效錶達瞭Hp1188重組蛋白,錶達蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠體內能阻止H.pylori 的定植.
목적:구건고효표체Hp1188중조단백적기인공정균pQE30-hp1188-DH5α,제순중조단백,감정기항원성화면역원성.통과소서관위시험,험증Hp1188단백조지유문라간균(Helicobacter pylori,H.pylori)재위내정식적작용.방법:구건중조질립pQE30-hp1188,DNA측서분석정학후,전화대장간균DH5α,IPTG유도표체.표체단백용Ni2+-NTA수지순화,SDS-PAGE분석순도,Bradford법측정농도,Western blot감정대상응항원적특이성,쌍향경지확산실험검측효개.순화중조단백화점막좌제곽란독소B아단위(Cholera toxin subunit B,CTB)적혼합액관위면역접충예방조BALB/c소서,동시설음성대조조화양성대조조,면역4주후용H.pylori NCTC 11637공격3차,말차공격4주후처사소서,진행위조직H.pylori 배양;H.pylori 정식반정량、염증정도급기염증활동도적평분,이평개중조단백대위조직H.pylori 감염적면역보호작용.결과:구건적중조표체질립pQE30-hp1188경DNA측서증실서렬완정,삽입적기인편단전장810 bp,여기인문고중적hp1188기인동원성체98%,병재대장간균DH5α중표체출분자량약위30 kD대소적가용성목적단백,표체량점전균총량적47%,표체단백순화후순도체90%,농도위1.0 mg/ml.Western blot증실유량호항원결합특이성,쌍향경지확산효개위1∶16.예방조H.pylori 감염솔、정식급염증정도평분균명현저우양성대조조(P＜0.05).예방조불부가이강저H.pylori 적정식,이차능감경H.pylori조성적소서위조직적국부만성염증반응.결론:성공구건료기인공정균pQE30-hp1188-DH5α,병고효표체료Hp1188중조단백,표체단백구유량호적항원성화면역원성,재소서체내능조지H.pylori 적정식.
