中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
5期
878-881
,共4页
新等位基因%人类白细胞抗原B%PCR-SSO%PCR-SBT%原核表达%表达载体pET30a(+)
新等位基因%人類白細胞抗原B%PCR-SSO%PCR-SBT%原覈錶達%錶達載體pET30a(+)
신등위기인%인류백세포항원B%PCR-SSO%PCR-SBT%원핵표체%표체재체pET30a(+)
背景:国际上至2010-04共报告人类白细胞抗原4 633个等位基因,中国自2000年至少发现200个新的等位基因,由于资金和时间有限,大部分新等位基因未作血清分型、家系研究以及进一步的功能性研究.目的:在健康志愿者人群中发现新等位基因,并对其进行家系研究,同时构建重链胞外区多肽的原核细胞表达载体,鉴定其在原核细胞中是否表达.方法:利用PCR-SSO和PCR-SBT技术,对人群的人类白细胞抗原进行筛选.使用血清学和SBT技术对拥有新等位基因的供者进行家系分析.用分子克隆的方法构建表达载体转染原核细胞,运用Western-blot鉴定是否表达.结果与结论:发现一个新等位基因与人类白细胞抗原B*15:18:01在第419位相差一个核苷酸,C->T, 即Codon116位 TCC->TTC,导致氨基酸由丝氨酸改变成苯丙氨酸.最终确定命名为人类白细胞抗原B*15:133.血清学表达B71(70)抗原.发现此供者的新等位基因来自于母亲.表达载体pET30a(+)- B*15:133在原核细胞中表达的多肽可被抗HIS标签单克隆抗体特异性识别.结果表明,使用分子生物学技术在大样本的筛查下发现了新等位基因人类白细胞抗原B*15:133,利用分子克隆的方法成功构建表达载体pET30a(+)- B*15:133,并在原核细胞中有大量高纯度蛋白表达.
揹景:國際上至2010-04共報告人類白細胞抗原4 633箇等位基因,中國自2000年至少髮現200箇新的等位基因,由于資金和時間有限,大部分新等位基因未作血清分型、傢繫研究以及進一步的功能性研究.目的:在健康誌願者人群中髮現新等位基因,併對其進行傢繫研究,同時構建重鏈胞外區多肽的原覈細胞錶達載體,鑒定其在原覈細胞中是否錶達.方法:利用PCR-SSO和PCR-SBT技術,對人群的人類白細胞抗原進行篩選.使用血清學和SBT技術對擁有新等位基因的供者進行傢繫分析.用分子剋隆的方法構建錶達載體轉染原覈細胞,運用Western-blot鑒定是否錶達.結果與結論:髮現一箇新等位基因與人類白細胞抗原B*15:18:01在第419位相差一箇覈苷痠,C->T, 即Codon116位 TCC->TTC,導緻氨基痠由絲氨痠改變成苯丙氨痠.最終確定命名為人類白細胞抗原B*15:133.血清學錶達B71(70)抗原.髮現此供者的新等位基因來自于母親.錶達載體pET30a(+)- B*15:133在原覈細胞中錶達的多肽可被抗HIS標籤單剋隆抗體特異性識彆.結果錶明,使用分子生物學技術在大樣本的篩查下髮現瞭新等位基因人類白細胞抗原B*15:133,利用分子剋隆的方法成功構建錶達載體pET30a(+)- B*15:133,併在原覈細胞中有大量高純度蛋白錶達.
배경:국제상지2010-04공보고인류백세포항원4 633개등위기인,중국자2000년지소발현200개신적등위기인,유우자금화시간유한,대부분신등위기인미작혈청분형、가계연구이급진일보적공능성연구.목적:재건강지원자인군중발현신등위기인,병대기진행가계연구,동시구건중련포외구다태적원핵세포표체재체,감정기재원핵세포중시부표체.방법:이용PCR-SSO화PCR-SBT기술,대인군적인류백세포항원진행사선.사용혈청학화SBT기술대옹유신등위기인적공자진행가계분석.용분자극륭적방법구건표체재체전염원핵세포,운용Western-blot감정시부표체.결과여결론:발현일개신등위기인여인류백세포항원B*15:18:01재제419위상차일개핵감산,C->T, 즉Codon116위 TCC->TTC,도치안기산유사안산개변성분병안산.최종학정명명위인류백세포항원B*15:133.혈청학표체B71(70)항원.발현차공자적신등위기인래자우모친.표체재체pET30a(+)- B*15:133재원핵세포중표체적다태가피항HIS표첨단극륭항체특이성식별.결과표명,사용분자생물학기술재대양본적사사하발현료신등위기인인류백세포항원B*15:133,이용분자극륭적방법성공구건표체재체pET30a(+)- B*15:133,병재원핵세포중유대량고순도단백표체.
