安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
24期
14899-14901,14974
,共4页
李业伟%孙程龙%韩乃君%王颖%扈荣良
李業偉%孫程龍%韓迺君%王穎%扈榮良
리업위%손정룡%한내군%왕영%호영량
伪狂犬病毒%犬瘟热病毒%H基因%病毒栽体
偽狂犬病毒%犬瘟熱病毒%H基因%病毒栽體
위광견병독%견온열병독%H기인%병독재체
[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性.[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移栽体p8AA上.在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移栽体,命名为p8AAZH.将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV) Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液.通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达.同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线.[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致.[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础.
[目的]構建錶達犬瘟熱Onderstepoort株H蛋白的重組偽狂犬病毒,併研究其生物學特性.[方法]通過RT-PCR方法穫得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真覈細胞錶達盒併將此錶達盒亞剋隆到轉移栽體p8AA上.在此基礎上再將報告基因LacZ的錶達盒插入轉移栽體,命名為p8AAZH.將p8AAZH與偽狂犬病毒(PRV) Bartha-K61株基因組共轉染至BHK-21細胞中進行基因重組包裝齣毒,待細胞病變後收集病毒液.通過藍色蝕斑篩選、PCR、電鏡觀察以及Western blot,篩選純化重組病毒併鑒定目的基因的錶達.同時在BHK-21細胞上測定重組病毒的生長麯線.[結果]穫得瞭錶達H蛋白的重組偽狂犬病毒,重組病毒與親本Bartha-K61株的生長麯線、病變特徵相一緻.[結論]成功構建瞭錶達犬瘟熱Onderstepoort株H蛋白的重組偽狂犬病毒,H基因的插入不影響重組病毒的增殖特性,為犬瘟熱活病毒載體疫苗的研製與開髮打下瞭基礎.
[목적]구건표체견온열Onderstepoort주H단백적중조위광견병독,병연구기생물학특성.[방법]통과RT-PCR방법획득Onderstepoort주H기인,삽입pcDNA3.1(+)건립호완정적진핵세포표체합병장차표체합아극륭도전이재체p8AA상.재차기출상재장보고기인LacZ적표체합삽입전이재체,명명위p8AAZH.장p8AAZH여위광견병독(PRV) Bartha-K61주기인조공전염지BHK-21세포중진행기인중조포장출독,대세포병변후수집병독액.통과람색식반사선、PCR、전경관찰이급Western blot,사선순화중조병독병감정목적기인적표체.동시재BHK-21세포상측정중조병독적생장곡선.[결과]획득료표체H단백적중조위광견병독,중조병독여친본Bartha-K61주적생장곡선、병변특정상일치.[결론]성공구건료표체견온열Onderstepoort주H단백적중조위광견병독,H기인적삽입불영향중조병독적증식특성,위견온열활병독재체역묘적연제여개발타하료기출.
