实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2012年
2期
178-180
,共3页
兰芬%郭紫芬%邓坤龙%廖端芳%李凯
蘭芬%郭紫芬%鄧坤龍%廖耑芳%李凱
란분%곽자분%산곤룡%료단방%리개
β地中海贫血%高保真聚合酶%硫化修饰引物
β地中海貧血%高保真聚閤酶%硫化脩飾引物
β지중해빈혈%고보진취합매%류화수식인물
目的:采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血.方法:首先提取正常人血液基因组DNA,根据已知β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS2-654区域序列,分别设计突变序列扩增引物,利用低保真酶进行引物延伸反应,将其PCR产物克隆到pMD19-T载体,得到β地中海贫血常见的两个突变住点的基因突变克隆:CD41-42、IVS2-654,然后以这两个突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因住点或突变基因位点配对的引物,硫化磷酸修饰3'末端并偶联高保真DNA聚合酶构成的基因突变敏感性分子开关,对含有相应突变的阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应,并通过凝胶成像系统对其进行分析.结果:当引物与模板完全配对时,引物被延伸,有PCR产物:当引物与模板不完全配对时,引物不被延伸,无PCR产物.结论:高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关能准确、快速筛查β地中海贫血CD41-42、IVS2-654突变,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景.
目的:採用高保真DNA聚閤酶介導的基因突變敏感性分子開關準確、快速檢測β地中海貧血.方法:首先提取正常人血液基因組DNA,根據已知β珠蛋白基因熱點突變CD41-42、IVS2-654區域序列,分彆設計突變序列擴增引物,利用低保真酶進行引物延伸反應,將其PCR產物剋隆到pMD19-T載體,得到β地中海貧血常見的兩箇突變住點的基因突變剋隆:CD41-42、IVS2-654,然後以這兩箇突變位點為檢測靶點,分彆設計3'末耑與野生型基因住點或突變基因位點配對的引物,硫化燐痠脩飾3'末耑併偶聯高保真DNA聚閤酶構成的基因突變敏感性分子開關,對含有相應突變的暘性質粒模闆及正常人基因組DNA模闆進行引物延伸反應,併通過凝膠成像繫統對其進行分析.結果:噹引物與模闆完全配對時,引物被延伸,有PCR產物:噹引物與模闆不完全配對時,引物不被延伸,無PCR產物.結論:高保真DNA聚閤酶介導的基因突變敏感性分子開關能準確、快速篩查β地中海貧血CD41-42、IVS2-654突變,提示其在單基因遺傳病的診斷中具有廣闊的應用前景.
목적:채용고보진DNA취합매개도적기인돌변민감성분자개관준학、쾌속검측β지중해빈혈.방법:수선제취정상인혈액기인조DNA,근거이지β주단백기인열점돌변CD41-42、IVS2-654구역서렬,분별설계돌변서렬확증인물,이용저보진매진행인물연신반응,장기PCR산물극륭도pMD19-T재체,득도β지중해빈혈상견적량개돌변주점적기인돌변극륭:CD41-42、IVS2-654,연후이저량개돌변위점위검측파점,분별설계3'말단여야생형기인주점혹돌변기인위점배대적인물,류화린산수식3'말단병우련고보진DNA취합매구성적기인돌변민감성분자개관,대함유상응돌변적양성질립모판급정상인기인조DNA모판진행인물연신반응,병통과응효성상계통대기진행분석.결과:당인물여모판완전배대시,인물피연신,유PCR산물:당인물여모판불완전배대시,인물불피연신,무PCR산물.결론:고보진DNA취합매개도적기인돌변민감성분자개관능준학、쾌속사사β지중해빈혈CD41-42、IVS2-654돌변,제시기재단기인유전병적진단중구유엄활적응용전경.
