四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2008年
4期
544-546
,共3页
汪川%张朝武%余倩%刘衡川%裴晓方
汪川%張朝武%餘倩%劉衡川%裴曉方
왕천%장조무%여천%류형천%배효방
β-半乳糖苷酶基因%非融合%表达重组%德氏乳杆菌保加利亚亚种
β-半乳糖苷酶基因%非融閤%錶達重組%德氏乳桿菌保加利亞亞種
β-반유당감매기인%비융합%표체중조%덕씨유간균보가리아아충
目的 在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础.方法 选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18 bp到ATG下游1 bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒.转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性.结果 重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ 1.1480的大肠杆菌DH5a酶活性为3.074 U/mL,酶比活性为6.939 U/mg pro;携带重组质粒pMG36e-lacZ wch9901的大肠杆菌DH5a酶活性为4.755 U/mL,酶比活性为8.537 U/mg pro.结论 成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达.
目的 在大腸桿菌中非融閤錶達德氏乳桿菌保加利亞亞種β-半乳糖苷酶,為構建能高效錶達β-半乳糖苷酶的食品級益生菌株奠定基礎.方法 選擇德氏乳桿菌保加利亞亞種(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密碼ATG上遊-18 bp到ATG下遊1 bp的一段包含SD位點和ATGA位點的序列為上遊引物,PCR擴增lacZ,插入錶達質粒pMG36e構建重組錶達質粒.轉化大腸桿菌,篩選暘性剋隆,提取重組質粒進行酶切鑒定和測序,併測定轉化菌β-半乳糖苷酶活性.結果 重組質粒酶切鑒定閤格;其中插入的外源片段序列與德氏乳桿菌保加利亞亞種lacZ標準序列符閤率達99%以上;攜帶重組質粒pMG36e-lacZ 1.1480的大腸桿菌DH5a酶活性為3.074 U/mL,酶比活性為6.939 U/mg pro;攜帶重組質粒pMG36e-lacZ wch9901的大腸桿菌DH5a酶活性為4.755 U/mL,酶比活性為8.537 U/mg pro.結論 成功在大腸桿菌中非融閤錶達瞭德氏乳桿菌保加利亞亞種β-半乳糖苷酶;本研究選擇的SD位點和ATGA位點能在大腸桿菌中有效地引導蛋白的非融閤錶達.
목적 재대장간균중비융합표체덕씨유간균보가리아아충β-반유당감매,위구건능고효표체β-반유당감매적식품급익생균주전정기출.방법 선택덕씨유간균보가리아아충(1.1480화wch9901)β-반유당감매기인(lacZ)기시밀마ATG상유-18 bp도ATG하유1 bp적일단포함SD위점화ATGA위점적서렬위상유인물,PCR확증lacZ,삽입표체질립pMG36e구건중조표체질립.전화대장간균,사선양성극륭,제취중조질립진행매절감정화측서,병측정전화균β-반유당감매활성.결과 중조질립매절감정합격;기중삽입적외원편단서렬여덕씨유간균보가리아아충lacZ표준서렬부합솔체99%이상;휴대중조질립pMG36e-lacZ 1.1480적대장간균DH5a매활성위3.074 U/mL,매비활성위6.939 U/mg pro;휴대중조질립pMG36e-lacZ wch9901적대장간균DH5a매활성위4.755 U/mL,매비활성위8.537 U/mg pro.결론 성공재대장간균중비융합표체료덕씨유간균보가리아아충β-반유당감매;본연구선택적SD위점화ATGA위점능재대장간균중유효지인도단백적비융합표체.
