科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
3期
367-373
,共7页
董海辉%邱玉华%陈永井%胡静平%黄光镁%朱江
董海輝%邱玉華%陳永井%鬍靜平%黃光鎂%硃江
동해휘%구옥화%진영정%호정평%황광미%주강
单克隆抗体%单链抗体%B7-2%原核表达
單剋隆抗體%單鏈抗體%B7-2%原覈錶達
단극륭항체%단련항체%B7-2%원핵표체
在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因.通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基冈之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因.为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列.将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达.SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化.获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%.成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础.
在成功建立穩定分泌鼠抗人B7-2雜交瘤細胞株基礎上,擴增併剋隆齣該單剋隆抗體的重鏈(VH)和輕鏈(VL)可變區基因.通過重疊延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可變區基岡之間引入連接肽(Gly4Ser)3,體外構建抗人B7-2單鏈抗體(B7-2 ScFv)基因.為便于錶達產物的純化,在抗人B7-2 ScFv的C耑增加瞭6×His tag序列.將其剋隆至錶達載體pET32a併在大腸桿菌中進行原覈錶達.SDS-PAGE和Western-blot分析結果錶明,抗人B7-2 ScFv在大腸桿菌BL21(DE3)菌中穫得錶達,重組融閤蛋白的相對分子量約為43 kD,錶達產物以不溶性包涵體形式存在,經溶解包涵體,體外複性和Ni-NTA親和柱純化.穫得瞭高純度的抗人B7-2 ScFv,純化蛋白得率約16.2%.成果為抗人B7-2單鏈抗體的生物學活性研究和抗腫瘤藥物開髮奠定瞭基礎.
재성공건립은정분비서항인B7-2잡교류세포주기출상,확증병극륭출해단극륭항체적중련(VH)화경련(VL)가변구기인.통과중첩연신PCR(SOE-PCR)방법,재VH화VL가변구기강지간인입련접태(Gly4Ser)3,체외구건항인B7-2단련항체(B7-2 ScFv)기인.위편우표체산물적순화,재항인B7-2 ScFv적C단증가료6×His tag서렬.장기극륭지표체재체pET32a병재대장간균중진행원핵표체.SDS-PAGE화Western-blot분석결과표명,항인B7-2 ScFv재대장간균BL21(DE3)균중획득표체,중조융합단백적상대분자량약위43 kD,표체산물이불용성포함체형식존재,경용해포함체,체외복성화Ni-NTA친화주순화.획득료고순도적항인B7-2 ScFv,순화단백득솔약16.2%.성과위항인B7-2단련항체적생물학활성연구화항종류약물개발전정료기출.
