西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
4期
444-446,466
,共4页
郝晓娟%李端%陈丽萍%赵甫涛%赵英仁%贾战生
郝曉娟%李耑%陳麗萍%趙甫濤%趙英仁%賈戰生
학효연%리단%진려평%조보도%조영인%가전생
丙型肝炎病毒%细胞毒性T淋巴细胞%表位
丙型肝炎病毒%細胞毒性T淋巴細胞%錶位
병형간염병독%세포독성T림파세포%표위
目的 构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复合细胞毒性T淋巴细胞(CTL)多表位基因的真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达.方法 根据生物信息学方法筛选中国人的HCV多个CTL优势表位,合成复合多表位抗原基因(mcf);将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1,转染COS-7细胞,在荧光显微镜下观察mcf-EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位,RT-PCR及Western blot检测其mRNA及蛋白表达.结果 成功构建了真核表达载体pEGFP-mcf.将构建的真核表达载体pEGFP-mcf转染 COS-7细胞后,绿色荧光分布于COS-7细胞胞质中;而转染空载体pEGFP-N1后,绿色荧光弥散分布于COS-7细胞胞核及胞质中.RT-PCR检测到转染细胞中mcf mRNA表达;Western blot结果证明合成mcf可在COS-7细胞中表达.结论 该真核表达载体的成功表达及鉴定,为下一步中国人的HCV复合CTL多表位疫苗的研究奠定了基础.
目的 構建中國人丙型肝炎病毒(HCV)複閤細胞毒性T淋巴細胞(CTL)多錶位基因的真覈錶達載體,併觀察其在真覈細胞中的錶達.方法 根據生物信息學方法篩選中國人的HCV多箇CTL優勢錶位,閤成複閤多錶位抗原基因(mcf);將其剋隆入真覈錶達載體pEGFP-N1,轉染COS-7細胞,在熒光顯微鏡下觀察mcf-EGFP融閤蛋白在細胞中的分佈和定位,RT-PCR及Western blot檢測其mRNA及蛋白錶達.結果 成功構建瞭真覈錶達載體pEGFP-mcf.將構建的真覈錶達載體pEGFP-mcf轉染 COS-7細胞後,綠色熒光分佈于COS-7細胞胞質中;而轉染空載體pEGFP-N1後,綠色熒光瀰散分佈于COS-7細胞胞覈及胞質中.RT-PCR檢測到轉染細胞中mcf mRNA錶達;Western blot結果證明閤成mcf可在COS-7細胞中錶達.結論 該真覈錶達載體的成功錶達及鑒定,為下一步中國人的HCV複閤CTL多錶位疫苗的研究奠定瞭基礎.
목적 구건중국인병형간염병독(HCV)복합세포독성T림파세포(CTL)다표위기인적진핵표체재체,병관찰기재진핵세포중적표체.방법 근거생물신식학방법사선중국인적HCV다개CTL우세표위,합성복합다표위항원기인(mcf);장기극륭입진핵표체재체pEGFP-N1,전염COS-7세포,재형광현미경하관찰mcf-EGFP융합단백재세포중적분포화정위,RT-PCR급Western blot검측기mRNA급단백표체.결과 성공구건료진핵표체재체pEGFP-mcf.장구건적진핵표체재체pEGFP-mcf전염 COS-7세포후,록색형광분포우COS-7세포포질중;이전염공재체pEGFP-N1후,록색형광미산분포우COS-7세포포핵급포질중.RT-PCR검측도전염세포중mcf mRNA표체;Western blot결과증명합성mcf가재COS-7세포중표체.결론 해진핵표체재체적성공표체급감정,위하일보중국인적HCV복합CTL다표위역묘적연구전정료기출.
