中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2012年
2期
86-90,96
,共6页
毛黎敏%张勇%李阳源%黄海%李波%李文笙%陈国华%林浩然
毛黎敏%張勇%李暘源%黃海%李波%李文笙%陳國華%林浩然
모려민%장용%리양원%황해%리파%리문생%진국화%림호연
花鳗鲡%促黄体生成激素%linker%共表达载体pPICZαA-LHβα%毕赤酵母
花鰻鱺%促黃體生成激素%linker%共錶達載體pPICZαA-LHβα%畢赤酵母
화만려%촉황체생성격소%linker%공표체재체pPICZαA-LHβα%필적효모
采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以linker将两个基因连接成单个基因LHβα.然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα.再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7％甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000.
採用聚閤酶鏈反應從花鰻鱺垂體cDNA中分彆擴增齣GTHα、LHβ基因,再利用搭橋技術,中間以linker將兩箇基因連接成單箇基因LHβα.然後利用雙酶切、連接,將LHβα基因連接到載體pPICZαA中,構建齣促黃體生成素的酵母共錶達載體pPICZαA-LHβα.再利用電轉化法將其轉入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同濃度的zeocinYPDS平闆上篩選高拷貝轉化子,暘性剋隆經φ=0.7％甲醇誘導錶達,錶達產物採用SDS-PAGE和western blot進行分析,得到所錶達的產物相對分子質量約為45 000.
채용취합매련반응종화만려수체cDNA중분별확증출GTHα、LHβ기인,재이용탑교기술,중간이linker장량개기인련접성단개기인LHβα.연후이용쌍매절、련접,장LHβα기인련접도재체pPICZαA중,구건출촉황체생성소적효모공표체재체pPICZαA-LHβα.재이용전전화법장기전입도효모야생형균주X-33중,재함불동농도적zeocinYPDS평판상사선고고패전화자,양성극륭경φ=0.7％갑순유도표체,표체산물채용SDS-PAGE화western blot진행분석,득도소표체적산물상대분자질량약위45 000.
