生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2003年
6期
546-548
,共3页
俞慕华%曾忠铭%段永翔%黄锐敏%叶友松%雷智刚%詹希美
俞慕華%曾忠銘%段永翔%黃銳敏%葉友鬆%雷智剛%詹希美
유모화%증충명%단영상%황예민%협우송%뢰지강%첨희미
腮腺炎病毒%逆转录聚合酶链反应%电穿孔%噬菌体抗体
腮腺炎病毒%逆轉錄聚閤酶鏈反應%電穿孔%噬菌體抗體
시선염병독%역전록취합매련반응%전천공%서균체항체
应用噬菌体表面呈现技术,从腮腺炎病毒抗体阳性者淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增出抗体重链Fd和轻链基因,经XhoI/5peI、SacI/XbaI双酶切,先后克隆入噬粒载体pComb3中,再电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助.噬菌体VCSM13进行超感染.从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700 bp大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5 kV、200Ω、25μF的条件下电转化,转化率为2.48×107.最终得到库容量为6.4×106,滴度为7.8×1013 cfu/L的噬菌体抗体库.所构建的抗腮腺炎病毒特异性噬菌体抗体库容量中等大小,能满足从中筛选抗HN蛋白噬菌体抗体的需要.
應用噬菌體錶麵呈現技術,從腮腺炎病毒抗體暘性者淋巴細胞中提取總RNA,經RT-PCR擴增齣抗體重鏈Fd和輕鏈基因,經XhoI/5peI、SacI/XbaI雙酶切,先後剋隆入噬粒載體pComb3中,再電轉化大腸桿菌XL1-blue,以輔助.噬菌體VCSM13進行超感染.從分離齣的淋巴細胞中共提取高質量RNA約110μg,經逆轉錄、PCR,分彆擴增齣約700 bp大小的κ、λ和Fd基因.PCR產物和載體經純化、雙酶切後進行連接,在2.5 kV、200Ω、25μF的條件下電轉化,轉化率為2.48×107.最終得到庫容量為6.4×106,滴度為7.8×1013 cfu/L的噬菌體抗體庫.所構建的抗腮腺炎病毒特異性噬菌體抗體庫容量中等大小,能滿足從中篩選抗HN蛋白噬菌體抗體的需要.
응용서균체표면정현기술,종시선염병독항체양성자림파세포중제취총RNA,경RT-PCR확증출항체중련Fd화경련기인,경XhoI/5peI、SacI/XbaI쌍매절,선후극륭입서립재체pComb3중,재전전화대장간균XL1-blue,이보조.서균체VCSM13진행초감염.종분리출적림파세포중공제취고질량RNA약110μg,경역전록、PCR,분별확증출약700 bp대소적κ、λ화Fd기인.PCR산물화재체경순화、쌍매절후진행련접,재2.5 kV、200Ω、25μF적조건하전전화,전화솔위2.48×107.최종득도고용량위6.4×106,적도위7.8×1013 cfu/L적서균체항체고.소구건적항시선염병독특이성서균체항체고용량중등대소,능만족종중사선항HN단백서균체항체적수요.
