中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
1期
20-27
,共8页
赵佳慧%赵乐群%程庆砾%陈香美%朱圣庚
趙佳慧%趙樂群%程慶礫%陳香美%硃聖庚
조가혜%조악군%정경력%진향미%주골경
细胞间粘附分子1%噬菌体展示随机多肽库%亲和淘选%炎症
細胞間粘附分子1%噬菌體展示隨機多肽庫%親和淘選%炎癥
세포간점부분자1%서균체전시수궤다태고%친화도선%염증
采用两种方法对噬菌体展示随机十五肽库进行亲和淘选.EuSA法筛选特异结合高亲和力的阳性噬菌体单克隆,测序,得到6个与人细胞间粘附分子1(ICAM-1)高亲和力的噬菌体展示十五肽单克隆.再经EuSA法从这6个噬菌体单克隆中选择与ICAM-1亲和力最高的单克隆,同时利用蛋白空间结构位象模拟技术对小肽与ICAM-1的亲和力进行模拟研究.最终获取目的小肽的氨基酸序列为GRGEFRGRDNSVSVV.目的单克隆噬菌体与ICAM-1的亲和常数Ka为7.87×107 L/mol.体外合成、纯化并标记目的小肽.EKUSA法验证目的小肽与人ICAM-1的结合呈浓度依赖性,抗ICAM-1多抗不能拮抗目的小肽与ICAM-1的结合.采用免疫组化方法证实,此目的小肽具有与炎症组织中高表达的ICAM-1特异性结合的功能.在动物体内,荧光标记的目的小肽具有向高表达ICAM-1的炎症部位特异性聚集的功能.说明此目的肽可尝试作为以ICAM-1为靶的"肽导向药物"的前导肽.
採用兩種方法對噬菌體展示隨機十五肽庫進行親和淘選.EuSA法篩選特異結閤高親和力的暘性噬菌體單剋隆,測序,得到6箇與人細胞間粘附分子1(ICAM-1)高親和力的噬菌體展示十五肽單剋隆.再經EuSA法從這6箇噬菌體單剋隆中選擇與ICAM-1親和力最高的單剋隆,同時利用蛋白空間結構位象模擬技術對小肽與ICAM-1的親和力進行模擬研究.最終穫取目的小肽的氨基痠序列為GRGEFRGRDNSVSVV.目的單剋隆噬菌體與ICAM-1的親和常數Ka為7.87×107 L/mol.體外閤成、純化併標記目的小肽.EKUSA法驗證目的小肽與人ICAM-1的結閤呈濃度依賴性,抗ICAM-1多抗不能拮抗目的小肽與ICAM-1的結閤.採用免疫組化方法證實,此目的小肽具有與炎癥組織中高錶達的ICAM-1特異性結閤的功能.在動物體內,熒光標記的目的小肽具有嚮高錶達ICAM-1的炎癥部位特異性聚集的功能.說明此目的肽可嘗試作為以ICAM-1為靶的"肽導嚮藥物"的前導肽.
채용량충방법대서균체전시수궤십오태고진행친화도선.EuSA법사선특이결합고친화력적양성서균체단극륭,측서,득도6개여인세포간점부분자1(ICAM-1)고친화력적서균체전시십오태단극륭.재경EuSA법종저6개서균체단극륭중선택여ICAM-1친화력최고적단극륭,동시이용단백공간결구위상모의기술대소태여ICAM-1적친화력진행모의연구.최종획취목적소태적안기산서렬위GRGEFRGRDNSVSVV.목적단극륭서균체여ICAM-1적친화상수Ka위7.87×107 L/mol.체외합성、순화병표기목적소태.EKUSA법험증목적소태여인ICAM-1적결합정농도의뢰성,항ICAM-1다항불능길항목적소태여ICAM-1적결합.채용면역조화방법증실,차목적소태구유여염증조직중고표체적ICAM-1특이성결합적공능.재동물체내,형광표기적목적소태구유향고표체ICAM-1적염증부위특이성취집적공능.설명차목적태가상시작위이ICAM-1위파적"태도향약물"적전도태.
