中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2004年
11期
56-60
,共5页
转谷氨酰胺酶%克隆表达%生物活性
轉穀氨酰胺酶%剋隆錶達%生物活性
전곡안선알매%극륭표체%생물활성
从轮枝链霉菌Streptoverticillium mobaraense细胞中获得其基因组DNA,用一对特异性的引物通过PCR的方法扩增出转谷氨酰胺酶(transglutaminase,TGase)全长基因,回收片段并将其连接到表达载体pER30a中,转化大肠杆菌DH5α.双向测序表明获得的转谷氨酰胺酶全长基因序列正确.纯化重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),以1mmol/L IPYG诱导5h收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,与阴性对照相比,明显多出了一条蛋白条带,紫外扫描显示此带约占总蛋白量的17%,Western blotting证实此带能够特异性地与兔抗MTG(味之素公司)的抗体发生反应.测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到15.1U/mg蛋白.
從輪枝鏈黴菌Streptoverticillium mobaraense細胞中穫得其基因組DNA,用一對特異性的引物通過PCR的方法擴增齣轉穀氨酰胺酶(transglutaminase,TGase)全長基因,迴收片段併將其連接到錶達載體pER30a中,轉化大腸桿菌DH5α.雙嚮測序錶明穫得的轉穀氨酰胺酶全長基因序列正確.純化重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),以1mmol/L IPYG誘導5h收集菌體進行SDS-PAGE電泳分析,與陰性對照相比,明顯多齣瞭一條蛋白條帶,紫外掃描顯示此帶約佔總蛋白量的17%,Western blotting證實此帶能夠特異性地與兔抗MTG(味之素公司)的抗體髮生反應.測得純化後得到的TGase蛋白的酶活可以達到15.1U/mg蛋白.
종륜지련매균Streptoverticillium mobaraense세포중획득기기인조DNA,용일대특이성적인물통과PCR적방법확증출전곡안선알매(transglutaminase,TGase)전장기인,회수편단병장기련접도표체재체pER30a중,전화대장간균DH5α.쌍향측서표명획득적전곡안선알매전장기인서렬정학.순화중조질립전화대장간균BL21(DE3),이1mmol/L IPYG유도5h수집균체진행SDS-PAGE전영분석,여음성대조상비,명현다출료일조단백조대,자외소묘현시차대약점총단백량적17%,Western blotting증실차대능구특이성지여토항MTG(미지소공사)적항체발생반응.측득순화후득도적TGase단백적매활가이체도15.1U/mg단백.
