内蒙古农业大学学报（自然科学版）
內矇古農業大學學報（自然科學版）
내몽고농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF INNER MONGOLIA AGRICULTURAL UNIIVERSITY
2007年
4期
137-142,184
,共7页
包晓兰%王和平%包力高%周平%蔺日胜%赵丽霞
包曉蘭%王和平%包力高%週平%藺日勝%趙麗霞
포효란%왕화평%포력고%주평%린일성%조려하
β-甘露聚糖酶%组成型表达%GAP启动子%25S rDNA
β-甘露聚糖酶%組成型錶達%GAP啟動子%25S rDNA
β-감로취당매%조성형표체%GAP계동자%25S rDNA
应用PCR方法从P.pastorisGS115染色体中扩增了GAP启动子(PGAP),大小为500bp左右,以其取代诱导型表达载体pPIC9K上的AOX1启动子(PAox1),构建了组成型表达载体pGAP;再从野生型酵母菌JSY4染色体中扩增出25S rDNA保守序列,大小为1 700bp左右,以其取代组成型表达pGAP上的组氨酸脱氢酶基因(HIS4)片断,构建了整合组成型表达载体pGAP-rDNA.再双酶切重组质粒pT002 Man Ⅰ得编码a-甘露聚糖酶的Man Ⅰ基因片断插入pGAP-rDNA的多克隆位点(MCS),获得含有目的基因Man Ⅰ的重组整合组成型表达载体pGAP-rDNA-Man Ⅰ.CaCl2法转化感受态大肠杆菌DHSá,对阳性克隆进行质粒PCR鉴定和单、双酶切鉴定.结果表明:成功构建了重组组成型表达载体pGAP-rDNA-Man Ⅰ,为下一步野生型酵母菌JSY4中β-甘露聚糖酶的组成型表达打下基础.
應用PCR方法從P.pastorisGS115染色體中擴增瞭GAP啟動子(PGAP),大小為500bp左右,以其取代誘導型錶達載體pPIC9K上的AOX1啟動子(PAox1),構建瞭組成型錶達載體pGAP;再從野生型酵母菌JSY4染色體中擴增齣25S rDNA保守序列,大小為1 700bp左右,以其取代組成型錶達pGAP上的組氨痠脫氫酶基因(HIS4)片斷,構建瞭整閤組成型錶達載體pGAP-rDNA.再雙酶切重組質粒pT002 Man Ⅰ得編碼a-甘露聚糖酶的Man Ⅰ基因片斷插入pGAP-rDNA的多剋隆位點(MCS),穫得含有目的基因Man Ⅰ的重組整閤組成型錶達載體pGAP-rDNA-Man Ⅰ.CaCl2法轉化感受態大腸桿菌DHSá,對暘性剋隆進行質粒PCR鑒定和單、雙酶切鑒定.結果錶明:成功構建瞭重組組成型錶達載體pGAP-rDNA-Man Ⅰ,為下一步野生型酵母菌JSY4中β-甘露聚糖酶的組成型錶達打下基礎.
응용PCR방법종P.pastorisGS115염색체중확증료GAP계동자(PGAP),대소위500bp좌우,이기취대유도형표체재체pPIC9K상적AOX1계동자(PAox1),구건료조성형표체재체pGAP;재종야생형효모균JSY4염색체중확증출25S rDNA보수서렬,대소위1 700bp좌우,이기취대조성형표체pGAP상적조안산탈경매기인(HIS4)편단,구건료정합조성형표체재체pGAP-rDNA.재쌍매절중조질립pT002 Man Ⅰ득편마a-감로취당매적Man Ⅰ기인편단삽입pGAP-rDNA적다극륭위점(MCS),획득함유목적기인Man Ⅰ적중조정합조성형표체재체pGAP-rDNA-Man Ⅰ.CaCl2법전화감수태대장간균DHSá,대양성극륭진행질립PCR감정화단、쌍매절감정.결과표명:성공구건료중조조성형표체재체pGAP-rDNA-Man Ⅰ,위하일보야생형효모균JSY4중β-감로취당매적조성형표체타하기출.
