医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2008年
3期
210-215
,共6页
杨阳%孔维佳%李隽%胡钰娟%彭炜%钟毅%郝亚楠
楊暘%孔維佳%李雋%鬍鈺娟%彭煒%鐘毅%郝亞楠
양양%공유가%리준%호옥연%팽위%종의%학아남
锰超氧化物歧化酶%腺相关病毒2型%转染%边缘细胞%耳蜗
錳超氧化物歧化酶%腺相關病毒2型%轉染%邊緣細胞%耳蝸
맹초양화물기화매%선상관병독2형%전염%변연세포%이와
目的 构建含有大鼠源性锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,检测其在大鼠耳血管纹边缘细胞和耳蜗组织内的表达.方法 将大鼠心肌组织来源的SOD基因克隆入融合表达载体pEGFP-N1中,再以限制性酶切方法克隆入真核表达载体pSNAV2.0-IRES-EGFP中,最后将其包装为rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD病毒颗粒,用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、RT-PCR及Western印迹检测MnSOD基因的表达.结果 真核表达载体pEGFP-N1/MnSOD和pSNAV2.0-IRES-EGFP/MnSOD经酶切、PCR和测序鉴定均检测到MnSOD基因的完整序列,被rAAV2-EGFP/MnSOD感染的耳边缘细胞和内耳组织中MnSOD蛋白的表达均高于空白对照耳.结论 成功构建了大鼠源性MnSOD基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,并使其在大鼠耳边缘细胞和大鼠耳蜗组织中成功表达,为抗氧化基因治疗内耳疾病的研究奠定了基础.
目的 構建含有大鼠源性錳超氧化物歧化酶(MnSOD)基因的重組病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,檢測其在大鼠耳血管紋邊緣細胞和耳蝸組織內的錶達.方法 將大鼠心肌組織來源的SOD基因剋隆入融閤錶達載體pEGFP-N1中,再以限製性酶切方法剋隆入真覈錶達載體pSNAV2.0-IRES-EGFP中,最後將其包裝為rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD病毒顆粒,用激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、RT-PCR及Western印跡檢測MnSOD基因的錶達.結果 真覈錶達載體pEGFP-N1/MnSOD和pSNAV2.0-IRES-EGFP/MnSOD經酶切、PCR和測序鑒定均檢測到MnSOD基因的完整序列,被rAAV2-EGFP/MnSOD感染的耳邊緣細胞和內耳組織中MnSOD蛋白的錶達均高于空白對照耳.結論 成功構建瞭大鼠源性MnSOD基因的重組病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,併使其在大鼠耳邊緣細胞和大鼠耳蝸組織中成功錶達,為抗氧化基因治療內耳疾病的研究奠定瞭基礎.
목적 구건함유대서원성맹초양화물기화매(MnSOD)기인적중조병독rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,검측기재대서이혈관문변연세포화이와조직내적표체.방법 장대서심기조직래원적SOD기인극륭입융합표체재체pEGFP-N1중,재이한제성매절방법극륭입진핵표체재체pSNAV2.0-IRES-EGFP중,최후장기포장위rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD병독과립,용격광공취초현미경、류식세포의、RT-PCR급Western인적검측MnSOD기인적표체.결과 진핵표체재체pEGFP-N1/MnSOD화pSNAV2.0-IRES-EGFP/MnSOD경매절、PCR화측서감정균검측도MnSOD기인적완정서렬,피rAAV2-EGFP/MnSOD감염적이변연세포화내이조직중MnSOD단백적표체균고우공백대조이.결론 성공구건료대서원성MnSOD기인적중조병독rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,병사기재대서이변연세포화대서이와조직중성공표체,위항양화기인치료내이질병적연구전정료기출.
