中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
33期
6177-6181
,共5页
王文玉%樊红琨%赵国强%乔鹏%王书春%伍钢
王文玉%樊紅琨%趙國彊%喬鵬%王書春%伍鋼
왕문옥%번홍곤%조국강%교붕%왕서춘%오강
慢病毒载体%Beclin1基因%A549细胞%过表达%组织构建
慢病毒載體%Beclin1基因%A549細胞%過錶達%組織構建
만병독재체%Beclin1기인%A549세포%과표체%조직구건
背景:Beclin1基因是哺乳动物的自噬调控基因.目的:实验拟构建Beclin1 基因慢病毒过表达载体.方法:聚合酶链反应扩增目的基因Beclin1 后插入慢病毒表达载体pLenex中,构建重组载体pLenex-Beclin1.使用聚合酶链反应、双酶切和DNA的测序方法对其进行鉴定,并与辅助包装质粒共感染293T细胞.慢病毒颗粒转染非小细胞肺癌A549细胞后,用蛋白质印迹法检测Beclin1 基因的过表达效率.结果与结论:聚合酶链反应鉴定结果显示扩增的阳性片段已插入pLenex 载体,聚合酶链反应、双酶切和DNA测序结果表明,重组慢病毒载体pLenex-Beclin1 的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染A549细胞后,细胞内Beclin1蛋白高效表达.结果证实,实验成功构建了Beclin1 基因慢病毒过表达载体.
揹景:Beclin1基因是哺乳動物的自噬調控基因.目的:實驗擬構建Beclin1 基因慢病毒過錶達載體.方法:聚閤酶鏈反應擴增目的基因Beclin1 後插入慢病毒錶達載體pLenex中,構建重組載體pLenex-Beclin1.使用聚閤酶鏈反應、雙酶切和DNA的測序方法對其進行鑒定,併與輔助包裝質粒共感染293T細胞.慢病毒顆粒轉染非小細胞肺癌A549細胞後,用蛋白質印跡法檢測Beclin1 基因的過錶達效率.結果與結論:聚閤酶鏈反應鑒定結果顯示擴增的暘性片段已插入pLenex 載體,聚閤酶鏈反應、雙酶切和DNA測序結果錶明,重組慢病毒載體pLenex-Beclin1 的插入序列完全正確,重組慢病毒載體感染A549細胞後,細胞內Beclin1蛋白高效錶達.結果證實,實驗成功構建瞭Beclin1 基因慢病毒過錶達載體.
배경:Beclin1기인시포유동물적자서조공기인.목적:실험의구건Beclin1 기인만병독과표체재체.방법:취합매련반응확증목적기인Beclin1 후삽입만병독표체재체pLenex중,구건중조재체pLenex-Beclin1.사용취합매련반응、쌍매절화DNA적측서방법대기진행감정,병여보조포장질립공감염293T세포.만병독과립전염비소세포폐암A549세포후,용단백질인적법검측Beclin1 기인적과표체효솔.결과여결론:취합매련반응감정결과현시확증적양성편단이삽입pLenex 재체,취합매련반응、쌍매절화DNA측서결과표명,중조만병독재체pLenex-Beclin1 적삽입서렬완전정학,중조만병독재체감염A549세포후,세포내Beclin1단백고효표체.결과증실,실험성공구건료Beclin1 기인만병독과표체재체.
