南昌大学学报（理科版）
南昌大學學報（理科版）
남창대학학보（이과판）
JOURNAL OF NANCHANG UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2011年
4期
389-392
,共4页
AGR2%乳腺癌%凋亡
AGR2%乳腺癌%凋亡
AGR2%유선암%조망
将AGR2基因的shRNA表达序列连接到pSUPER质粒中,获得pSUPER-shAGR2质粒,经测序鉴定后,将pSUPER-shAGR2和pSUPER质粒通过Lipofectamine2000转染MCF7细胞,经流式细胞仪和600 μg·mL-1G418筛选获得稳定干扰AGR2的MCF7细胞系和对照细胞系,Western blot检测其RNA干扰效果,MTT检测细胞生长情况;用无血清酚红培养基饥饿12 h后,25 ng·mL-1EGF处理15 min,Western blot检测ERK活化和PARP水平.测序结果证实AGR2shRNA核苷酸链序列插入正确,RNA干扰能有效降低MCF7细胞中AGR2的蛋白表达水平；稳定干扰AGR2的MCF7细胞系,细胞生长缓慢,ERK活化水平显著降低,而凋亡核心蛋白PARP也明显上调.稳定干扰AGR2的MCF7细胞系成功建立,发现RNA干扰AGR2抑制其生长和促进其凋亡,为AGR2作为乳腺癌预后与治疗研究靶点提供更充分的理论依据.
將AGR2基因的shRNA錶達序列連接到pSUPER質粒中,穫得pSUPER-shAGR2質粒,經測序鑒定後,將pSUPER-shAGR2和pSUPER質粒通過Lipofectamine2000轉染MCF7細胞,經流式細胞儀和600 μg·mL-1G418篩選穫得穩定榦擾AGR2的MCF7細胞繫和對照細胞繫,Western blot檢測其RNA榦擾效果,MTT檢測細胞生長情況;用無血清酚紅培養基饑餓12 h後,25 ng·mL-1EGF處理15 min,Western blot檢測ERK活化和PARP水平.測序結果證實AGR2shRNA覈苷痠鏈序列插入正確,RNA榦擾能有效降低MCF7細胞中AGR2的蛋白錶達水平；穩定榦擾AGR2的MCF7細胞繫,細胞生長緩慢,ERK活化水平顯著降低,而凋亡覈心蛋白PARP也明顯上調.穩定榦擾AGR2的MCF7細胞繫成功建立,髮現RNA榦擾AGR2抑製其生長和促進其凋亡,為AGR2作為乳腺癌預後與治療研究靶點提供更充分的理論依據.
장AGR2기인적shRNA표체서렬련접도pSUPER질립중,획득pSUPER-shAGR2질립,경측서감정후,장pSUPER-shAGR2화pSUPER질립통과Lipofectamine2000전염MCF7세포,경류식세포의화600 μg·mL-1G418사선획득은정간우AGR2적MCF7세포계화대조세포계,Western blot검측기RNA간우효과,MTT검측세포생장정황;용무혈청분홍배양기기아12 h후,25 ng·mL-1EGF처리15 min,Western blot검측ERK활화화PARP수평.측서결과증실AGR2shRNA핵감산련서렬삽입정학,RNA간우능유효강저MCF7세포중AGR2적단백표체수평；은정간우AGR2적MCF7세포계,세포생장완만,ERK활화수평현저강저,이조망핵심단백PARP야명현상조.은정간우AGR2적MCF7세포계성공건립,발현RNA간우AGR2억제기생장화촉진기조망,위AGR2작위유선암예후여치료연구파점제공경충분적이론의거.
