中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
10期
909-913
,共5页
曹芳芳%孟凡亮%乔博%张茂俊%张建中
曹芳芳%孟凡亮%喬博%張茂俊%張建中
조방방%맹범량%교박%장무준%장건중
空肠弯曲菌%克隆表达%AhpC%抗原性
空腸彎麯菌%剋隆錶達%AhpC%抗原性
공장만곡균%극륭표체%AhpC%항원성
目的 构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ah pC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础.方法 用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ah pC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21( DE3),IPTG诱导重组质粒pG EX-ah pC的表达.SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白.应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用.结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功.重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性.结论 成功构建了ah pC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达.空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原.
目的 構建空腸彎麯菌烷基過氧化氫還原酶(ah pC)基因的原覈錶達繫統,剋隆錶達AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法檢測錶達蛋白的抗原性,為篩選空腸彎麯菌感染後特異性抗體檢測試劑的製備奠定基礎.方法 用PCR方法從中國分離菌株ICDCCJ07001的染色體DNA中擴增齣ah pC基因,將目的基因插入錶達載體pGEX-4T-1後轉化入大腸桿菌E.coliBL21( DE3),IPTG誘導重組質粒pG EX-ah pC的錶達.SDS-PAGE分析錶達產物,採用GST標籤親和層析柱純化錶達蛋白.應用兔免疫血清、臨床感染者血清以及健康無感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性併初步評價其在ELISA檢測方法中的應用.結果 PCR擴增及雙酶切鑒定證實重組質粒構建成功.重組錶達蛋白經飛行質譜鑒定為空腸彎麯菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA檢測結果顯示AhpC具有特異抗原性.結論 成功構建瞭ah pC重組錶達載體pGEX-4T-1/ahpC,併在大腸桿菌中高效錶達.空腸彎麯菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作為空腸彎麯菌感染後血清抗體檢測的特異抗原.
목적 구건공장만곡균완기과양화경환원매(ah pC)기인적원핵표체계통,극륭표체AhpC단백,용Western blot이급ELISA방법검측표체단백적항원성,위사선공장만곡균감염후특이성항체검측시제적제비전정기출.방법 용PCR방법종중국분리균주ICDCCJ07001적염색체DNA중확증출ah pC기인,장목적기인삽입표체재체pGEX-4T-1후전화입대장간균E.coliBL21( DE3),IPTG유도중조질립pG EX-ah pC적표체.SDS-PAGE분석표체산물,채용GST표첨친화층석주순화표체단백.응용토면역혈청、림상감염자혈청이급건강무감염자혈청,이용Western blot이급ELISA적방법분석AhpC단백적항원성병초보평개기재ELISA검측방법중적응용.결과 PCR확증급쌍매절감정증실중조질립구건성공.중조표체단백경비행질보감정위공장만곡균AhpC단백,Western blot급ELISA검측결과현시AhpC구유특이항원성.결론 성공구건료ah pC중조표체재체pGEX-4T-1/ahpC,병재대장간균중고효표체.공장만곡균AhpC단백구유항원성,가이작위공장만곡균감염후혈청항체검측적특이항원.
