北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2011年
6期
814-819
,共6页
徐晓艳%由江峰%裴斐%张波
徐曉豔%由江峰%裴斐%張波
서효염%유강봉%배비%장파
前列腺肿瘤%肿瘤转移%基因,肿瘤抑制%RNA,小分子干扰
前列腺腫瘤%腫瘤轉移%基因,腫瘤抑製%RNA,小分子榦擾
전렬선종류%종류전이%기인,종류억제%RNA,소분자간우
目的:研究特异性沉默人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,亦称TMSGI的小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)对人前列腺癌细胞系低转移潜能亚系PC-3M-2B4的体外侵袭能力的影响及相关机制.方法:通过脂质体转染法将特异性沉默LASS2基因的siRNA转染入PC-3M-2B4细胞.分别用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western blot方法检测LASS2siRNA对PC-3M-2B4细胞LASS2基因和蛋白表达的抑制作用,筛选有效的siRNA片段；运用液泡型ATPases( vacuolar H+ -ATPases,V -ATPases)活性测定试剂盒来检测PC-3M-2B4细胞的V-ATPases活性；运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测PC-3M-2B4细胞外氢离子浓度；采用Westem blot方法分析PC-3M-2B4细胞的基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达及分泌情况；应用明胶酶谱法检测PC-3M-2B4细胞上清液中MMP-2的活性；利用细胞划痕修复实验和Transwell法检测细胞体外迁移及侵袭能力.结果:通过RFQ-PCR和Westem blot筛选后,siRNA-2能显著抑制PC-3M-2B4细胞LASS2基因mRNA和蛋白的表达,对mRNA表达的抑制率可达84.5％,对蛋白表达的抑制率可达60％.PC-3M-2B4细胞转染LASS2 siRNA-2后,其V-ATPases的活性及细胞外氢离子浓度明显升高,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2的活性形式增加,与空白对照组相比明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05)；且细胞的体外迁移及侵袭能力明显高于空白对照组(P＜0.05).结论:特异性siRNA沉默LASS2基因能促进入前列腺癌细胞体外侵袭能力,其机制与沉默LASS2基因后激活V-ATPase,从而使细胞外氢离子浓度升高,进而激活MMP-2有关,提示LASS2基因是一新的肿瘤转移抑制基因.
目的:研究特異性沉默人源性長壽保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,亦稱TMSGI的小榦擾RNA( small interfering RNA,siRNA)對人前列腺癌細胞繫低轉移潛能亞繫PC-3M-2B4的體外侵襲能力的影響及相關機製.方法:通過脂質體轉染法將特異性沉默LASS2基因的siRNA轉染入PC-3M-2B4細胞.分彆用實時熒光定量PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western blot方法檢測LASS2siRNA對PC-3M-2B4細胞LASS2基因和蛋白錶達的抑製作用,篩選有效的siRNA片段；運用液泡型ATPases( vacuolar H+ -ATPases,V -ATPases)活性測定試劑盒來檢測PC-3M-2B4細胞的V-ATPases活性；運用BCECF氫離子敏感熒光探針檢測PC-3M-2B4細胞外氫離子濃度；採用Westem blot方法分析PC-3M-2B4細胞的基質金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的錶達及分泌情況；應用明膠酶譜法檢測PC-3M-2B4細胞上清液中MMP-2的活性；利用細胞劃痕脩複實驗和Transwell法檢測細胞體外遷移及侵襲能力.結果:通過RFQ-PCR和Westem blot篩選後,siRNA-2能顯著抑製PC-3M-2B4細胞LASS2基因mRNA和蛋白的錶達,對mRNA錶達的抑製率可達84.5％,對蛋白錶達的抑製率可達60％.PC-3M-2B4細胞轉染LASS2 siRNA-2後,其V-ATPases的活性及細胞外氫離子濃度明顯升高,與空白對照組相比差異有統計學意義(P＜0.05)；MMP-2蛋白的錶達及分泌無明顯變化,但分泌的MMP-2的活性形式增加,與空白對照組相比明顯提高,差異有統計學意義(P＜0.05)；且細胞的體外遷移及侵襲能力明顯高于空白對照組(P＜0.05).結論:特異性siRNA沉默LASS2基因能促進入前列腺癌細胞體外侵襲能力,其機製與沉默LASS2基因後激活V-ATPase,從而使細胞外氫離子濃度升高,進而激活MMP-2有關,提示LASS2基因是一新的腫瘤轉移抑製基因.
목적:연구특이성침묵인원성장수보장기인2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,역칭TMSGI적소간우RNA( small interfering RNA,siRNA)대인전렬선암세포계저전이잠능아계PC-3M-2B4적체외침습능력적영향급상관궤제.방법:통과지질체전염법장특이성침묵LASS2기인적siRNA전염입PC-3M-2B4세포.분별용실시형광정량PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)화Western blot방법검측LASS2siRNA대PC-3M-2B4세포LASS2기인화단백표체적억제작용,사선유효적siRNA편단；운용액포형ATPases( vacuolar H+ -ATPases,V -ATPases)활성측정시제합래검측PC-3M-2B4세포적V-ATPases활성；운용BCECF경리자민감형광탐침검측PC-3M-2B4세포외경리자농도；채용Westem blot방법분석PC-3M-2B4세포적기질금속단백매2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)적표체급분비정황；응용명효매보법검측PC-3M-2B4세포상청액중MMP-2적활성；이용세포화흔수복실험화Transwell법검측세포체외천이급침습능력.결과:통과RFQ-PCR화Westem blot사선후,siRNA-2능현저억제PC-3M-2B4세포LASS2기인mRNA화단백적표체,대mRNA표체적억제솔가체84.5％,대단백표체적억제솔가체60％.PC-3M-2B4세포전염LASS2 siRNA-2후,기V-ATPases적활성급세포외경리자농도명현승고,여공백대조조상비차이유통계학의의(P＜0.05)；MMP-2단백적표체급분비무명현변화,단분비적MMP-2적활성형식증가,여공백대조조상비명현제고,차이유통계학의의(P＜0.05)；차세포적체외천이급침습능력명현고우공백대조조(P＜0.05).결론:특이성siRNA침묵LASS2기인능촉진입전렬선암세포체외침습능력,기궤제여침묵LASS2기인후격활V-ATPase,종이사세포외경리자농도승고,진이격활MMP-2유관,제시LASS2기인시일신적종류전이억제기인.
