第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
1期
40-43
,共4页
彭丹丹%宁云山%李妍%洪燕华%王云丹%吴芬芳%李明
彭丹丹%寧雲山%李妍%洪燕華%王雲丹%吳芬芳%李明
팽단단%저운산%리연%홍연화%왕운단%오분방%리명
复合抗原%单克隆抗体%蛋白质组学
複閤抗原%單剋隆抗體%蛋白質組學
복합항원%단극륭항체%단백질조학
目的建立通过单次细胞融合制备抗复合抗原(多种抗原)单克隆抗体的方法.方法用复合抗原(甲胎蛋白、癌胚抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎e抗原)免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体.通过Protein-G亲和层析纯化阳性杂交瘤细胞株腹水,并通过亚类试剂盒法和非竞争ELISA法分别测定抗体亚类和亲和常数,同时应用免疫印迹分析其特异性.结果通过单次细胞融合共获得20株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中针对甲胎蛋白的单克隆抗体5株、针对癌胚抗原的单克隆抗体6株、针对乙型肝炎表面抗原的单克隆抗体3株;针对乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体4株、针对乙型肝炎e抗原的单克隆抗体3株.已鉴定的部分阳性杂交瘤细胞株亚类均为IgG1,抗体亲和常数介于1×109M-1～2.8×1011M-1,免疫印迹分析显示,所获得的单抗都与其抗原发生特异性结合.结论建立了通过单次细胞融合制备针对复合抗原的单克隆抗体制备技术,使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,为建立规模化单克隆抗体制备平台奠定基础.
目的建立通過單次細胞融閤製備抗複閤抗原(多種抗原)單剋隆抗體的方法.方法用複閤抗原(甲胎蛋白、癌胚抗原、乙型肝炎錶麵抗原、乙型肝炎覈心抗原、乙型肝炎e抗原)免疫BALB/c小鼠,採用常規雜交瘤技術製備單剋隆抗體.通過Protein-G親和層析純化暘性雜交瘤細胞株腹水,併通過亞類試劑盒法和非競爭ELISA法分彆測定抗體亞類和親和常數,同時應用免疫印跡分析其特異性.結果通過單次細胞融閤共穫得20株抗上述複閤抗原的單剋隆抗體,其中針對甲胎蛋白的單剋隆抗體5株、針對癌胚抗原的單剋隆抗體6株、針對乙型肝炎錶麵抗原的單剋隆抗體3株;針對乙型肝炎覈心抗原的單剋隆抗體4株、針對乙型肝炎e抗原的單剋隆抗體3株.已鑒定的部分暘性雜交瘤細胞株亞類均為IgG1,抗體親和常數介于1×109M-1～2.8×1011M-1,免疫印跡分析顯示,所穫得的單抗都與其抗原髮生特異性結閤.結論建立瞭通過單次細胞融閤製備針對複閤抗原的單剋隆抗體製備技術,使單剋隆抗體的產齣率顯著提高,製備週期明顯縮短,為建立規模化單剋隆抗體製備平檯奠定基礎.
목적건립통과단차세포융합제비항복합항원(다충항원)단극륭항체적방법.방법용복합항원(갑태단백、암배항원、을형간염표면항원、을형간염핵심항원、을형간염e항원)면역BALB/c소서,채용상규잡교류기술제비단극륭항체.통과Protein-G친화층석순화양성잡교류세포주복수,병통과아류시제합법화비경쟁ELISA법분별측정항체아류화친화상수,동시응용면역인적분석기특이성.결과통과단차세포융합공획득20주항상술복합항원적단극륭항체,기중침대갑태단백적단극륭항체5주、침대암배항원적단극륭항체6주、침대을형간염표면항원적단극륭항체3주;침대을형간염핵심항원적단극륭항체4주、침대을형간염e항원적단극륭항체3주.이감정적부분양성잡교류세포주아류균위IgG1,항체친화상수개우1×109M-1～2.8×1011M-1,면역인적분석현시,소획득적단항도여기항원발생특이성결합.결론건립료통과단차세포융합제비침대복합항원적단극륭항체제비기술,사단극륭항체적산출솔현저제고,제비주기명현축단,위건립규모화단극륭항체제비평태전정기출.
