微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
1期
115-119
,共5页
蔡梅红%张素芳%曹瑞兵%郭伟玲%陈溥言
蔡梅紅%張素芳%曹瑞兵%郭偉玲%陳溥言
채매홍%장소방%조서병%곽위령%진부언
鸡γ干扰素%分泌表达%临床应用
鷄γ榦擾素%分泌錶達%臨床應用
계γ간우소%분비표체%림상응용
为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素,以Con A(刀豆素A)诱导培养4～10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因.通过EcoRⅠ和Xba Ⅰ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上,得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ,经BstxⅠ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中,通过PCR的方法来筛选重组酵母菌,在甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带.干扰素生物活性测定经典实验(微量病变抑制实验)和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景.
為瞭穫得具有天然抗病毒活性的重組酵母鷄γ榦擾素,以Con A(刀豆素A)誘導培養4～10h的鷄全血中提取的淋巴細胞總RNA為模闆,通過RT-PCR的方法擴增齣鷄γ榦擾素成熟蛋白基因.通過EcoRⅠ和Xba Ⅰ兩箇酶切位點把鷄γ榦擾素成熟蛋白基因插入到酵母錶達載體pPICZa-A上,得到瞭重組酵母鷄γ榦擾素錶達載體pPICZa-A-CHIFN-γ,經BstxⅠ線性化後的重組載體被轉入酵母菌株X33中,通過PCR的方法來篩選重組酵母菌,在甲醇誘導錶達後,SDS-PAGE結果顯示有兩株重組菌在誘導72h後其錶達上清中有大小為16kDa的目的條帶.榦擾素生物活性測定經典實驗(微量病變抑製實驗)和臨床初步應用結果皆說明重組酵母鷄γ榦擾素具有較彊的抗病毒的生物活性和較好的臨床使用前景.
위료획득구유천연항병독활성적중조효모계γ간우소,이Con A(도두소A)유도배양4～10h적계전혈중제취적림파세포총RNA위모판,통과RT-PCR적방법확증출계γ간우소성숙단백기인.통과EcoRⅠ화Xba Ⅰ량개매절위점파계γ간우소성숙단백기인삽입도효모표체재체pPICZa-A상,득도료중조효모계γ간우소표체재체pPICZa-A-CHIFN-γ,경BstxⅠ선성화후적중조재체피전입효모균주X33중,통과PCR적방법래사선중조효모균,재갑순유도표체후,SDS-PAGE결과현시유량주중조균재유도72h후기표체상청중유대소위16kDa적목적조대.간우소생물활성측정경전실험(미량병변억제실험)화림상초보응용결과개설명중조효모계γ간우소구유교강적항병독적생물활성화교호적림상사용전경.
