CAJ | 학술논문

为了阐明鼻咽癌中高表达的p53蛋白聚集与失活的机制,高通量地检测与p53功能相关的蛋白质,首先采用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2的p53基因表达,然后用蛋白质组技术研究稳定沉默该基因对鼻咽癌蛋白质表达谱的影响.通过对稳定干扰p53基因后鼻咽癌细胞系CNE2的蛋白质表达谱改变的研究,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)验证鉴定了22个差异表达蛋白质.在这些差异表达蛋白质中,有些是已经报道的p53功能相关蛋白质,如热休克蛋白27(HSP27)、异质性胞核核糖核蛋白K(hnRNPK)、14-3-3σ等,其他可能是新的p53功能相关蛋白质,如eIF4B、TPT1、hnRNPH3、SFRS1等.部分差异表达蛋白质如HSP27、14-3-3σ和GRP75经蛋白质印迹分析技术进行了验证,同时pcDNA3.1-FLAG-p53质粒转染CNE2细胞引起了HSP27、14-3-3σ表达下调,GRP75表达上调.在鼻咽癌细胞中鉴定的22个差异表达蛋白质大致可以分为5类,包括信号传导相关蛋白质、分子伴侣、与转录和翻译相关蛋白质、代谢相关蛋白和细胞结构相关蛋白质,涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为p53功能相关蛋白质,为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.
위료천명비인암중고표체적p53단백취집여실활적궤제,고통량지검측여p53공능상관적단백질,수선채용RNA간우(RNAi)기술은정침묵비인암세포계CNE2적p53기인표체,연후용단백질조기술연구은정침묵해기인대비인암단백질표체보적영향.통과대은정간우p53기인후비인암세포계CNE2적단백질표체보개변적연구,용기질보조격광해흡전리비행시간질보(MALDI-TOF-MS)분석화전분무천련질보(ESI-Q-TOF-MS)험증감정료22개차이표체단백질.재저사차이표체단백질중,유사시이경보도적p53공능상관단백질,여열휴극단백27(HSP27)、이질성포핵핵당핵단백K(hnRNPK)、14-3-3σ등,기타가능시신적p53공능상관단백질,여eIF4B、TPT1、hnRNPH3、SFRS1등.부분차이표체단백질여HSP27、14-3-3σ화GRP75경단백질인적분석기술진행료험증,동시pcDNA3.1-FLAG-p53질립전염CNE2세포인기료HSP27、14-3-3σ표체하조,GRP75표체상조.재비인암세포중감정적22개차이표체단백질대치가이분위5류,포괄신호전도상관단백질、분자반려、여전록화번역상관단백질、대사상관단백화세포결구상관단백질,섭급도세포주기적조공、분자기인표체조공、세포점부、세포대사등음다사건,타문가능작위p53공능상관단백질,위천명비인암중p53단백취집급실활적궤제제공료중요의거화선색.