CAJ | 학술논문

目的建立稳定高效的刚地弓形虫RH株速殖子(以下简称弓形虫速殖子)体外培养模型.方法①将HeLa细胞(1×104个)接种置于细胞培养皿内底部的盖玻片,12h后将纯化的弓形虫速殖子接种于细胞培养皿(1×104个/皿),继续培养0.5～96 h,观察弓形虫速殖子在HeLa细胞内增殖情况;②将纯化的弓形虫速殖子接种于HeLa细胞后分为2组,一组于37℃分别培养24～120h后,移入25℃培养120h;另组于37℃培养48 h后,移人25℃分别培养72～168 h,观察不同温度和时间对弓形虫速殖子产率和活虫率的影响;③当培养的HeLa细胞80%发生细胞融合时更换速殖子培养液.同上法12 h后接种纯化的弓形虫速殖子进行培养,当80%HeLa细胞被感染增殖的弓形虫速殖子涨破时,收集、计数弓形虫速殖子,并用其感染(3×106个/瓶)新的HeLa细胞,观察其连续传代情况;④每隔5代取弓形虫速殖子,腹腔接种昆明小鼠(3×106个/只),观察小鼠存活时间、评价该体外培养条件对弓形虫速殖子毒力的影响.结果接种弓形虫速殖子96 h后HeLa细胞均被感染及涨破,培养弓形虫速殖子30代(3～4d为1代)增殖稳定,每代获得弓形虫速殖子1×107～5×107个,增殖5～20倍.各代弓形虫速殖子对昆明小鼠的平均致死时间为5.80～6.40 d,毒力未见减弱(P>0.05).HeLa细胞接种弓形虫速殖子,于37℃培养72 h后,移至25℃培养120 h,其产率高达40倍以上,活虫率为90%以上.仅残留极少量Hela细胞.结论刚地弓形虫RH株速殖子可在HeLa细胞中增殖并长期稳定传代.
목적 건립은정고효적강지궁형충RH주속식자(이하간칭궁형충속식자)체외배양모형.방법①장HeLa세포(1×104개)접충치우세포배양명내저부적개파편,12h후장순화적궁형충속식자접충우세포배양명(1×104개/명),계속배양0.5～96 h,관찰궁형충속식자재HeLa세포내증식정황;②장순화적궁형충속식자접충우HeLa세포후분위2조,일조우37℃분별배양24～120h후,이입25℃배양120h;령조우37℃배양48 h후,이인25℃분별배양72～168 h,관찰불동온도화시간대궁형충속식자산솔화활충솔적영향;③당배양적HeLa세포80%발생세포융합시경환속식자배양액.동상법12 h후접충순화적궁형충속식자진행배양,당80%HeLa세포피감염증식적궁형충속식자창파시,수집、계수궁형충속식자,병용기감염(3×106개/병)신적HeLa세포,관찰기련속전대정황;④매격5대취궁형충속식자,복강접충곤명소서(3×106개/지),관찰소서존활시간、평개해체외배양조건대궁형충속식자독력적영향.결과 접충궁형충속식자96 h후HeLa세포균피감염급창파,배양궁형충속식자30대(3～4d위1대)증식은정,매대획득궁형충속식자1×107～5×107개,증식5～20배.각대궁형충속식자대곤명소서적평균치사시간위5.80～6.40 d,독력미견감약(P>0.05).HeLa세포접충궁형충속식자,우37℃배양72 h후,이지25℃배양120 h,기산솔고체40배이상,활충솔위90%이상.부잔류겁소량Hela세포.결론 강지궁형충RH주속식자가재HeLa세포중증식병장기은정전대.