CAJ | 학술논문

背景:瘦素及其受体在中枢和外周多个部位均有表达,具有多种生物学功能,对于骨代谢有着重要的影响作用,但目前瘦素影响骨重建的机制尚未完全明了.目的:探讨瘦素对入骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2008-09在山西医科大学生化与分子生物学实验室完成.材料:健康志愿者髂骨骨髓由山西医科大学第二医院提供.瘦素为Sigma公司产品.方法:采用全骨髓法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代以1×108L-1密度接种至预置盖玻片的6孔培养板中,设立3组:成骨诱导组添加原代培养液后,再加入含10-8 mol/L地塞米松、10 mmol/L β-磷酸甘油,50 mg/L维生素C的成骨诱导培养基:成骨+瘦素诱导组添加成骨诱导培养基后,再加入50 nmol/L瘦素;空白对照组仅加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液.主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面标志表达、钙化结节染色结果、碱性磷酸酶活性,Ⅰ型胶原及骨钙素含量、骨保护素和RANKL蛋白的表达.结果:第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD71阳性率分别为95.21%,72.31%,CD34阳性率仅为0.39%.成骨诱导21 d后von Kossa染色可见呈棕黑色的细胞外基质钙盐沉积.诱导14 d与空白对照组比较,成骨诱导组、成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原、骨钙素含量均明显升高(P＜0.05);且成骨+瘦素诱导组各指标升高幅度明显高于成骨诱导组(P＜0.05).与成骨诱导组比较,成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞骨保护素蛋白的表达明显上调(P＜0.05),RANKL蛋白的表达明显下调(P＜0.05).结论:瘦素作用于人骨髓间充质干细胞后可促使其向成骨细胞分化,可能通过骨保护素/RANKL途径发挥对骨代谢的调节作用.
배경:수소급기수체재중추화외주다개부위균유표체,구유다충생물학공능,대우골대사유착중요적영향작용,단목전수소영향골중건적궤제상미완전명료.목적:탐토수소대입골수간충질간세포성골분화능력적영향.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-03/2008-09재산서의과대학생화여분자생물학실험실완성.재료:건강지원자가골골수유산서의과대학제이의원제공.수소위Sigma공사산품.방법:채용전골수법체외분리배양인골수간충질간세포,전지제3대이1×108L-1밀도접충지예치개파편적6공배양판중,설립3조:성골유도조첨가원대배양액후,재가입함10-8 mol/L지새미송、10 mmol/L β-린산감유,50 mg/L유생소C적성골유도배양기:성골+수소유도조첨가성골유도배양기후,재가입50 nmol/L수소;공백대조조부가입함체적분수위10%태우혈청적LG-DMEM배양액.주요관찰지표:골수간충질간세포표면표지표체、개화결절염색결과、감성린산매활성,Ⅰ형효원급골개소함량、골보호소화RANKL단백적표체.결과:제3대골수간충질간세포CD44화CD71양성솔분별위95.21%,72.31%,CD34양성솔부위0.39%.성골유도21 d후von Kossa염색가견정종흑색적세포외기질개염침적.유도14 d여공백대조조비교,성골유도조、성골+수소유도조골수간충질간세포내감성린산매활성급Ⅰ형효원、골개소함량균명현승고(P＜0.05);차성골+수소유도조각지표승고폭도명현고우성골유도조(P＜0.05).여성골유도조비교,성골+수소유도조골수간충질간세포골보호소단백적표체명현상조(P＜0.05),RANKL단백적표체명현하조(P＜0.05).결론:수소작용우인골수간충질간세포후가촉사기향성골세포분화,가능통과골보호소/RANKL도경발휘대골대사적조절작용.