华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
1期
93-97
,共5页
刘健%陈瑞爱%刘珊珊%朱杰仪%唐明森%罗满林
劉健%陳瑞愛%劉珊珊%硃傑儀%唐明森%囉滿林
류건%진서애%류산산%주걸의%당명삼%라만림
α干扰素%密码子改造%毕赤酵母%分泌表达
α榦擾素%密碼子改造%畢赤酵母%分泌錶達
α간우소%밀마자개조%필적효모%분비표체
根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经ZeocinTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDSPAGE和Wester-blot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107 U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达.
根據畢赤酵母Pichia pastoris錶達繫統對于密碼子的偏嗜性,將去除信號肽的豬α榦擾素(PoIFN-α)基因重新設計改造併閤成一段新的覈苷痠序列,置于畢赤酵母菌α因子分泌信號的DNA序列後,構建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重組錶達載體,電轉化進入野生型畢赤酵母菌X-33中,經ZeocinTM抗性篩選後穫得大量多拷貝重組子,SDSPAGE和Wester-blot分析結果錶明,所穫得的重組子能夠分泌錶達齣相對分子質量約為19 000的PoIFN-α特異蛋白,其有效蛋白錶達量較高達54.105 mg/L.經Vero-VSV繫統測定,PoIFN-α效價達到5.87×107 U/L.試驗將PoIFN-α成熟肽全基因密碼子進行改造,併實現瞭其在畢赤酵母菌錶達繫統中的高效分泌錶達.
근거필적효모Pichia pastoris표체계통대우밀마자적편기성,장거제신호태적저α간우소(PoIFN-α)기인중신설계개조병합성일단신적핵감산서렬,치우필적효모균α인자분비신호적DNA서렬후,구건성pPICZαC-PoIFN-α분비형중조표체재체,전전화진입야생형필적효모균X-33중,경ZeocinTM항성사선후획득대량다고패중조자,SDSPAGE화Wester-blot분석결과표명,소획득적중조자능구분비표체출상대분자질량약위19 000적PoIFN-α특이단백,기유효단백표체량교고체54.105 mg/L.경Vero-VSV계통측정,PoIFN-α효개체도5.87×107 U/L.시험장PoIFN-α성숙태전기인밀마자진행개조,병실현료기재필적효모균표체계통중적고효분비표체.
