中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
9期
44-51
,共8页
施开创%陈宏备%胡杰%覃芳芸%郑喜邦%李军
施開創%陳宏備%鬍傑%覃芳蕓%鄭喜邦%李軍
시개창%진굉비%호걸%담방예%정희방%리군
小鼠%IL-6%iNOS%荧光定量PCR%脑心肌炎病毒
小鼠%IL-6%iNOS%熒光定量PCR%腦心肌炎病毒
소서%IL-6%iNOS%형광정량PCR%뇌심기염병독
为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后IL-6、iNOS基因的表达水平,从分子水平深入研究EMCV的致病机制,分别针对小鼠IL-6、iNOS及管家基因β-actin的基因序列设计特异性引物和探针,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-6、iNOS和β-actin的TaqMan real-time PCR检测方法.该方法线性关系好,IL-6、iNOS和β-actin标准曲线的相关系数均达到0.998；敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101拷贝/μL；特异性强,只有以总RNA反转录成的cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号；重复性好,组内与组间的变异系数均小于2％.应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染小鼠的脑、心脏中IL-6、iNOS mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,本研究建立的TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于小鼠IL-6、iNOS基因的检测及定量分析.
為探討腦心肌炎病毒(EMCV)感染後IL-6、iNOS基因的錶達水平,從分子水平深入研究EMCV的緻病機製,分彆針對小鼠IL-6、iNOS及管傢基因β-actin的基因序列設計特異性引物和探針,構建含有各自引物擴增序列的重組質粒作為暘性標準品,建立瞭檢測IL-6、iNOS和β-actin的TaqMan real-time PCR檢測方法.該方法線性關繫好,IL-6、iNOS和β-actin標準麯線的相關繫數均達到0.998；敏感性高,初始模闆的檢齣下限均達到1×101拷貝/μL；特異性彊,隻有以總RNA反轉錄成的cDNA為模闆,併加入特異性引物和探針的反應纔檢測到熒光信號；重複性好,組內與組間的變異繫數均小于2％.應用所建立的檢測方法,對豬源EMCV GXLC株感染小鼠的腦、心髒中IL-6、iNOS mRNA的錶達水平進行瞭檢測.結果錶明,本研究建立的TaqMan real-time PCR檢測方法靈敏度高、特異性彊、重複性好,可以用于小鼠IL-6、iNOS基因的檢測及定量分析.
위탐토뇌심기염병독(EMCV)감염후IL-6、iNOS기인적표체수평,종분자수평심입연구EMCV적치병궤제,분별침대소서IL-6、iNOS급관가기인β-actin적기인서렬설계특이성인물화탐침,구건함유각자인물확증서렬적중조질립작위양성표준품,건립료검측IL-6、iNOS화β-actin적TaqMan real-time PCR검측방법.해방법선성관계호,IL-6、iNOS화β-actin표준곡선적상관계수균체도0.998；민감성고,초시모판적검출하한균체도1×101고패/μL；특이성강,지유이총RNA반전록성적cDNA위모판,병가입특이성인물화탐침적반응재검측도형광신호；중복성호,조내여조간적변이계수균소우2％.응용소건립적검측방법,대저원EMCV GXLC주감염소서적뇌、심장중IL-6、iNOS mRNA적표체수평진행료검측.결과표명,본연구건립적TaqMan real-time PCR검측방법령민도고、특이성강、중복성호,가이용우소서IL-6、iNOS기인적검측급정량분석.
