CAJ | 학술논문

针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用.以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗.Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法.结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8.生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b；5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800；血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性；相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点；2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104.应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20％的符合率.本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV 的c-ELISA检测方法.
침대소반추수역병독핵단백제비특이성적단극륭항체,병대기진행생물학특성감정화초보응용.이순화적Bacmid-PPRV-N중조단백위항원면역BALB/c소서,취면역소서적치민비세포여SP2/0골수류세포재PEG작용하융합,획득단극륭항체,병통과염색체기술등방법연구기생물학특성,장기작위경쟁단항.Bacmid-PPRV-N중조단백작위검측항원건립경쟁ELISA검측방법.결과표명:경극륭화간접ELISA사선,획득료2주능은정분비항소반추수역병독N단백항체적잡교류세포주,분별명명위5B11화3H10-3B8.생물학특성감정시험표명:5B11화3H10-3B8항체류형화아류균위IgG2b；5B11단항복수적효개체1∶819 200,3H10-3B8체1∶12 800；혈청학시험증명2주단항균능여Bacmid-PPRV-N중조단백항원결합,구유고도적특이성；상가ELISA시험결과현시,5B11화3H10-3B8 2주단극륭항체분별식별N단백상불동적항원위점；2주잡교류세포적염색체균위99～104.응용건립적c-ELISA검측방법대222빈혈청양품진행PPRV항체적검측,여삼고시제합비교득도98.20％적부합솔.본연구획득료2주능은정분비항PPRV N단백단극륭항체적잡교류세포주,이단항5B11작위경쟁항체건립료PPRV 적c-ELISA검측방법.