CAJ | 학술논문

目的探讨白血病细胞RNA冲击的完全缓解期的急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)衍生的树突细胞(mRNA-DC)体外刺激自体T细胞抗白血病免疫的可行性及有效性.方法应用联合细胞因子(GM-CSF、IL-4)培养法从AML-CR患者贴壁BMMNC诱导DC,在诱导的第5天用脂质体DOTAP介导法以自体白血病细胞的总RNA冲击DC,然后以含10ng/ml的TNF-α的培养基继续培养24 h促进其成熟,培养7 d后收获细胞,作为mRNA-DC.以流式细胞术检测DC特征性表型的表达;以MTT法测定mRNA-DC对自体T细胞的促增殖活性;将mRNA-DC与T细胞按1:3混合,共培养7 d,收获活化的T细胞,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定分泌γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞数;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒活性.结果14例AML-CR患者BMMNC均可在体外分化为具有特征性形态和表型的成熟DC;当刺激细胞与反应细胞比例为1:16时,mRNA-DC可刺激自体T细胞产生明显的增殖活性[(36.84±5.68)%],与未冲击DC组[(12.20±3.16)%]比较差异具有统计学意义(P＜0.05,n=9);ELISPOT分析显示分泌IFN-γ的mRNA反应性的T细胞得到明显扩增;体外活化的T细胞在效靶比为20:1时,对自体白血病细胞显示明显的杀伤活性[(45.46±6.34)%],与未冲击的DC组[(12.32±1.32)%]及单纯IL-2组[(13.26±2.28)%]比较,差异有统计学意义(P＜0.05,n=5).结论应用白血病细胞RNA冲击的DC疫苗免疫可以作为一种可行、有效的防治微量残留白血病的方法.
목적탐토백혈병세포RNA충격적완전완해기적급성수계백혈병(AML-CR)환자골수단개핵세포(BMMNC)연생적수돌세포(mRNA-DC)체외자격자체T세포항백혈병면역적가행성급유효성.방법응용연합세포인자(GM-CSF、IL-4)배양법종AML-CR환자첩벽BMMNC유도DC,재유도적제5천용지질체DOTAP개도법이자체백혈병세포적총RNA충격DC,연후이함10ng/ml적TNF-α적배양기계속배양24 h촉진기성숙,배양7 d후수획세포,작위mRNA-DC.이류식세포술검측DC특정성표형적표체;이MTT법측정mRNA-DC대자체T세포적촉증식활성;장mRNA-DC여T세포안1:3혼합,공배양7 d,수획활화적T세포,채용매련면역반점법(ELISPOT)측정분비γ간우소(IFN-γ)양성세포수;유산탈경매(LDH)석방법측정세포독활성.결과14례AML-CR환자BMMNC균가재체외분화위구유특정성형태화표형적성숙DC;당자격세포여반응세포비례위1:16시,mRNA-DC가자격자체T세포산생명현적증식활성[(36.84±5.68)%],여미충격DC조[(12.20±3.16)%]비교차이구유통계학의의(P＜0.05,n=9);ELISPOT분석현시분비IFN-γ적mRNA반응성적T세포득도명현확증;체외활화적T세포재효파비위20:1시,대자체백혈병세포현시명현적살상활성[(45.46±6.34)%],여미충격적DC조[(12.32±1.32)%]급단순IL-2조[(13.26±2.28)%]비교,차이유통계학의의(P＜0.05,n=5).결론응용백혈병세포RNA충격적DC역묘면역가이작위일충가행、유효적방치미량잔류백혈병적방법.