中华神经外科疾病研究杂志
中華神經外科疾病研究雜誌
중화신경외과질병연구잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROSURGICAL DISEASE RESEARCH
2006年
1期
16-18
,共3页
刘建雄%毛伯镛%李东燕%乔栎
劉建雄%毛伯鏞%李東燕%喬櫟
류건웅%모백용%리동연%교력
增强绿色荧光蛋白基因%神经干细胞%基因转染%脂质体
增彊綠色熒光蛋白基因%神經榦細胞%基因轉染%脂質體
증강록색형광단백기인%신경간세포%기인전염%지질체
目的用增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达载体pIRES2-EGFP转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),检测该真核表达载体对NSCs的转染效率及EGFP的表达状态,为用NSCs为载体基因治疗中枢神经系统疾病提供实验依据.方法体外扩增、酶切鉴定pIRES2-EGFP质粒;悬浮培养NSCs;阳离子脂质体lipofectamineTM2000介导增强绿色荧光蛋白质粒转染NSCs;庆大霉素的氨基糖苷(G418)筛选重组子;荧光显微镜观察转染效率及表达情况;免疫细胞化学鉴定重组子.结果转染后6 h,荧光蛋白偶见表达,24 h表达量明显增加,48 h达到最高峰,1个月后抗性细胞有克隆球形成.结论脂质体介导报告基因-pIRES2-EGFP转染NSCs的方法简单、效率高、易成功,是一较为理想的基因转染方法.
目的用增彊綠色熒光蛋白基因(EGFP)的錶達載體pIRES2-EGFP轉染神經榦細胞(neural stem cells,NSCs),檢測該真覈錶達載體對NSCs的轉染效率及EGFP的錶達狀態,為用NSCs為載體基因治療中樞神經繫統疾病提供實驗依據.方法體外擴增、酶切鑒定pIRES2-EGFP質粒;懸浮培養NSCs;暘離子脂質體lipofectamineTM2000介導增彊綠色熒光蛋白質粒轉染NSCs;慶大黴素的氨基糖苷(G418)篩選重組子;熒光顯微鏡觀察轉染效率及錶達情況;免疫細胞化學鑒定重組子.結果轉染後6 h,熒光蛋白偶見錶達,24 h錶達量明顯增加,48 h達到最高峰,1箇月後抗性細胞有剋隆毬形成.結論脂質體介導報告基因-pIRES2-EGFP轉染NSCs的方法簡單、效率高、易成功,是一較為理想的基因轉染方法.
목적용증강록색형광단백기인(EGFP)적표체재체pIRES2-EGFP전염신경간세포(neural stem cells,NSCs),검측해진핵표체재체대NSCs적전염효솔급EGFP적표체상태,위용NSCs위재체기인치료중추신경계통질병제공실험의거.방법체외확증、매절감정pIRES2-EGFP질립;현부배양NSCs;양리자지질체lipofectamineTM2000개도증강록색형광단백질립전염NSCs;경대매소적안기당감(G418)사선중조자;형광현미경관찰전염효솔급표체정황;면역세포화학감정중조자.결과전염후6 h,형광단백우견표체,24 h표체량명현증가,48 h체도최고봉,1개월후항성세포유극륭구형성.결론지질체개도보고기인-pIRES2-EGFP전염NSCs적방법간단、효솔고、역성공,시일교위이상적기인전염방법.
