自然科学进展
自然科學進展
자연과학진전
zirankexuejinzhan
2007年
6期
724-730
,共7页
高凤山%姜平%方青美%李云岗%李新生%王钦富%迟彦%夏春
高鳳山%薑平%方青美%李雲崗%李新生%王欽富%遲彥%夏春
고봉산%강평%방청미%리운강%리신생%왕흠부%지언%하춘
SLA-I单链复合体%T细胞表位%口蹄疫病毒
SLA-I單鏈複閤體%T細胞錶位%口蹄疫病毒
SLA-I단련복합체%T세포표위%구제역병독
目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOE PCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126-34)、Pep Ⅱ(FMDV/VP1157-165)和Pep Ⅲ(FMDV/VP145-53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.
目前,沒有研究豬SLA-I類複閤體限製性錶位的繫統.為瞭構建豬的SLA-I類複閤體,研究其相應重要病毒的限製性錶位,亞剋隆豬主要組織相容性複閤體重鏈基因SLA-2胞外區和輕鏈基因β2m成熟肽區,利用一富含甘氨痠和絲氨痠的Linker(G4S)3連接兩箇基因,通過SOE PCR體外構建瞭豬可溶性的單鏈複閤體SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],計算機方法設計3類口蹄疫病毒VP1蛋白的T細胞錶位,經化學閤成,分彆命名為PepⅠ(FMDV/VP126-34)、Pep Ⅱ(FMDV/VP1157-165)和Pep Ⅲ(FMDV/VP145-53),用以結閤單鏈複閤體蛋白SC-SLA-I.痠洗脫結閤質譜法測定SC-SLA-I結閤錶位,同時設定非相關蛋白和多肽的對照試驗.結果顯示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I結閤,而Pep Ⅲ及非相關多肽不能結閤,對照蛋白MBP的肽結閤試驗顯示陰性.結果錶明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ屬于SLA-I類限製性錶位.
목전,몰유연구저SLA-I류복합체한제성표위적계통.위료구건저적SLA-I류복합체,연구기상응중요병독적한제성표위,아극륭저주요조직상용성복합체중련기인SLA-2포외구화경련기인β2m성숙태구,이용일부함감안산화사안산적Linker(G4S)3련접량개기인,통과SOE PCR체외구건료저가용성적단련복합체SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],계산궤방법설계3류구제역병독VP1단백적T세포표위,경화학합성,분별명명위PepⅠ(FMDV/VP126-34)、Pep Ⅱ(FMDV/VP1157-165)화Pep Ⅲ(FMDV/VP145-53),용이결합단련복합체단백SC-SLA-I.산세탈결합질보법측정SC-SLA-I결합표위,동시설정비상관단백화다태적대조시험.결과현시,Pep Ⅰ화Pep Ⅱ균능화SC-SLA-I결합,이Pep Ⅲ급비상관다태불능결합,대조단백MBP적태결합시험현시음성.결과표명,다태Pep Ⅰ화Pep Ⅱ속우SLA-I류한제성표위.
