Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
Stxl-A아단위적원핵표체、복성급항원성감정
Prokaryotic Expression, Renaturalization and Antigenic Identification of Shiga Toxin I A Subunit
  • 万方数据
    医学分子生物学杂志 의학분자생물학잡지
    FOREIGN MEDICAL SCIENCES
    2008年 4期 319-322 ,共4页

    葛以跃%崔仑标%史智扬%焦永军%曾晓燕%戚宇华%唐震%单云峰%吴涛%汪华

    갈이약%최륜표%사지양%초영군%증효연%척우화%당진%단운봉%오도%왕화

    大肠埃希菌O157%志贺样毒素%质粒的构建与鉴定%原核表达 大腸埃希菌O157%誌賀樣毒素%質粒的構建與鑒定%原覈錶達
    대장애희균O157%지하양독소%질립적구건여감정%원핵표체
    目的 构建志贺毒素1-A亚单位(Stxl-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以大肠埃希菌0157 DNA为模板扩增Stxl-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌B121(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶协鉴定和测序分析后证实构建成功.重组蛋白经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stxl-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带.结论 成功构建了pET32a(+)/Stxl-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stxl-A蛋白,为进一步制备抗Stxl-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础.
    목적 구건지하독소1-A아단위(Stxl-A)원핵표체질립,사기재대장애희균중표체,대표체적중조단백진행순화,병탐토기항원성급응용개치.방법 이대장애희균0157 DNA위모판확증Stxl-A기인,중조극륭입원핵표체재체pET32a(+),전화대장애희균B121(DE3),이병기류대-반유당감(IPTG)유도표체,포함체경얼주주상복성화순화,병대순화산물진행Western인적감정.결과 중조질립경쌍매협감정화측서분석후증실구건성공.중조단백경십이완기광산납일취병희선알응효전영(SDS-PAGE)현시,기표체량점세균총단백량적15%좌우,주요이포함체형식존재,통과얼주주상복성획득순화적가용성Stxl-A단백,순도체95%이상,Western인적검측현시특이성조대.결론 성공구건료pET32a(+)/Stxl-A중조질립,병획득료구유항원특이성적가용성Stxl-A단백,위진일보제비항Stxl-A항체화연구기생물학공능전정료기출.
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