CAJ | 학술논문

利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSV ORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低.将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHITlll(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Western blot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面.将整合PRRSVE蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒粒子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLv-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高.
이용RT-PCR법확증저번식여호흡종합정병독(PRRSV)ORF5화ORF6기인,분별구건pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6화pcDNA-ORF5-ORF6진핵표체재체,린산개공침정법순시전염293T세포,48h후수집세포,류식세포의검측,결과표명:PRRSV ORF5기인편마낭막단백(E단백)능재재293T세포표면표체,이유공표체M단백(ORF6기인편마적기질단백)개도적E단백적표체량비단독E단백표체량고,천련표체여단독E단백상비교저.장pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6화pcDNA-ORF5-ORF6분별여MuLV가병독구건체계적량충골가재체pHIT60(포괄MuLV적결구단백기인,즉gag화pol)화pHITlll(위MuLV적기인조,환포괄일개보고기인LacZ)순시공전염293T세포,48h후수집가병독상청,초속리심후통과Western blot증실E단백능구재차가병독과립표면표체,증명E단백이정합도차가병독입자표면.장정합PRRSVE단백적가병독입자분별감염Marc-145화PAM숙주파세포,균능검측도LacZ기인적표체,결과표명:소구건적가병독입자구유감염성,차유M단백개도적MuLv-E/M감염성비MuLV-E가병독감염성고.