癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2010年
3期
175-178
,共4页
王革非%张驰%曾祥兴%张衡%陈幼莹%李卫中%李康生
王革非%張馳%曾祥興%張衡%陳幼瑩%李衛中%李康生
왕혁비%장치%증상흥%장형%진유형%리위중%리강생
反向遗传%RNA病毒%载体
反嚮遺傳%RNA病毒%載體
반향유전%RNA병독%재체
目的:用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA.为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体.方法:为提高转染和表达效率,首先改造peDNA3载体,通过酶切删除peDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除peDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区.利用长引物合成含有反向pol I启动子与多克隆位点的基因片段.将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入至经改造后的pcDNA3载体中,构建反向遗传通用表达载体.采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证.结果:PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明,载体构建正确,合成及插入序列与预期设计完全一致.结论:成功构建具有CMV与pol I双向启动子的反向遗传通用载体,为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础.
目的:用于負鏈RNA病毒的重組技術稱為反嚮遺傳技術,其覈心需要構建一箇具有雙嚮啟動子的反嚮遺傳通用載體,可以分彆正嚮轉錄翻譯病毒複製所需酶繫和負嚮轉錄病毒負鏈RNA.為此,構建負鏈RNA病毒反嚮遺傳通用的載體.方法:為提高轉染和錶達效率,首先改造peDNA3載體,通過酶切刪除peDNA3載體中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通過酶切去除peDNA3載體中非必需的Kan抗性錶達盒與CMV啟動子前區.利用長引物閤成含有反嚮pol I啟動子與多剋隆位點的基因片段.將閤成後的片段酶切、補平粘耑、連接,反嚮插入至經改造後的pcDNA3載體中,構建反嚮遺傳通用錶達載體.採用PCR檢測、酶切鑒定以及DNA測序進行驗證.結果:PCR檢測、酶切鑒定以及DNA測序結果錶明,載體構建正確,閤成及插入序列與預期設計完全一緻.結論:成功構建具有CMV與pol I雙嚮啟動子的反嚮遺傳通用載體,為建立負鏈RNA病毒反嚮遺傳平檯提供瞭研究基礎.
목적:용우부련RNA병독적중조기술칭위반향유전기술,기핵심수요구건일개구유쌍향계동자적반향유전통용재체,가이분별정향전록번역병독복제소수매계화부향전록병독부련RNA.위차,구건부련RNA병독반향유전통용적재체.방법:위제고전염화표체효솔,수선개조peDNA3재체,통과매절산제peDNA3재체중비필수서렬,재보류Amp항성적전제하,통과매절거제peDNA3재체중비필수적Kan항성표체합여CMV계동자전구.이용장인물합성함유반향pol I계동자여다극륭위점적기인편단.장합성후적편단매절、보평점단、련접,반향삽입지경개조후적pcDNA3재체중,구건반향유전통용표체재체.채용PCR검측、매절감정이급DNA측서진행험증.결과:PCR검측、매절감정이급DNA측서결과표명,재체구건정학,합성급삽입서렬여예기설계완전일치.결론:성공구건구유CMV여pol I쌍향계동자적반향유전통용재체,위건립부련RNA병독반향유전평태제공료연구기출.
