中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
24期
4402-4406
,共5页
郭伟韬%刘思景%王辉%肖启贤%陈子秋%黄云%王斌
郭偉韜%劉思景%王輝%肖啟賢%陳子鞦%黃雲%王斌
곽위도%류사경%왕휘%초계현%진자추%황운%왕빈
人骨形态发生蛋白2%人成纤维细胞生长因子2%腺病毒载体%内部核糖体进入位点序列%转染%基因治疗
人骨形態髮生蛋白2%人成纖維細胞生長因子2%腺病毒載體%內部覈糖體進入位點序列%轉染%基因治療
인골형태발생단백2%인성섬유세포생장인자2%선병독재체%내부핵당체진입위점서렬%전염%기인치료
背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法.目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定.方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010 ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体.
揹景:內部覈糖體進入位點序列載體能將上下遊基因共同轉錄,故通過此載體可使連接在一起的人骨形態髮生蛋白2和人成纖維細胞生長因子2同時高錶達,可為骨缺損的治療提供新方法.目的:實驗通過引入內部覈糖體進入位點序列,採用基于attLXattR的λ噬茵體位點特異性重組繫統的GatewayTM技術構建帶有人骨形態髮生蛋白2和人成纖維細胞生長因子2雙基因重組腺病毒載體併進行鑒定.方法:用聚閤酶鏈反應方法擴增人骨形態髮生蛋白2和人成纖維細胞生長因子2目的基因,將兩箇基因亞剋隆至pIRES2-EGFP載體中,構建phBMP2-IRES-hFGF2載體,通過BP反應將hBMP2-IRES-hFGF2重組到載體pDONR221中,再通過LR反應將其轉移到腺病毒載體pAd/CMV/V5-DEST中,線性化後轉染293細胞進行包裝穫得重組腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.結果與結論:phBMP2-IRES-hFGF2經酶切及測序鑒定正確,帶hBMP2-IRES-hFGF2的載體在293細胞中包裝成功,穫得成熟的病毒顆粒,病毒滴度為2.82×1010 ifu/mL,證實成功構建瞭帶有人骨形態髮生蛋白2和人成纖維細胞生長因子2雙基因重組腺病毒載體.
배경:내부핵당체진입위점서렬재체능장상하유기인공동전록,고통과차재체가사련접재일기적인골형태발생단백2화인성섬유세포생장인자2동시고표체,가위골결손적치료제공신방법.목적:실험통과인입내부핵당체진입위점서렬,채용기우attLXattR적λ서인체위점특이성중조계통적GatewayTM기술구건대유인골형태발생단백2화인성섬유세포생장인자2쌍기인중조선병독재체병진행감정.방법:용취합매련반응방법확증인골형태발생단백2화인성섬유세포생장인자2목적기인,장량개기인아극륭지pIRES2-EGFP재체중,구건phBMP2-IRES-hFGF2재체,통과BP반응장hBMP2-IRES-hFGF2중조도재체pDONR221중,재통과LR반응장기전이도선병독재체pAd/CMV/V5-DEST중,선성화후전염293세포진행포장획득중조선병독Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.결과여결론:phBMP2-IRES-hFGF2경매절급측서감정정학,대hBMP2-IRES-hFGF2적재체재293세포중포장성공,획득성숙적병독과립,병독적도위2.82×1010 ifu/mL,증실성공구건료대유인골형태발생단백2화인성섬유세포생장인자2쌍기인중조선병독재체.
