西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2011年
1期
24-28,64
,共6页
周建设%李明%陈其新%张驰%石晓卫%赵巧辉
週建設%李明%陳其新%張馳%石曉衛%趙巧輝
주건설%리명%진기신%장치%석효위%조교휘
猪%骨形态发生蛋白4%原核表达%条件
豬%骨形態髮生蛋白4%原覈錶達%條件
저%골형태발생단백4%원핵표체%조건
构建猪BMP4基因pET32a-BMP4原核表达质粒,在E.coli中表达并分离纯化目的蛋白.采用PCR技术以pMD18-T-BMP4重组质粒为模板扩增获得BMP4基因编码成熟肽片段,并插入到原核表达载体pET32a中,构建原核表达重组质粒pET32a-BMP4.将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,在不同的温度、IPTG浓度和时间下进行诱导表达,SDS-PAGE分析鉴定.构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,表达宿主菌经IPTG诱导表达分子量约为31 ku的融合蛋白,表达产物占菌体总蛋白的30%以上.成功构建了pET32a-BMP4原核表达质粒,并经纯化得到BMP4目的蛋白,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础.
構建豬BMP4基因pET32a-BMP4原覈錶達質粒,在E.coli中錶達併分離純化目的蛋白.採用PCR技術以pMD18-T-BMP4重組質粒為模闆擴增穫得BMP4基因編碼成熟肽片段,併插入到原覈錶達載體pET32a中,構建原覈錶達重組質粒pET32a-BMP4.將暘性重組質粒轉化到錶達宿主菌中,在不同的溫度、IPTG濃度和時間下進行誘導錶達,SDS-PAGE分析鑒定.構建的重組錶達質粒經PCR、酶切和DNA測序鑒定與預期的結果一緻,錶達宿主菌經IPTG誘導錶達分子量約為31 ku的融閤蛋白,錶達產物佔菌體總蛋白的30%以上.成功構建瞭pET32a-BMP4原覈錶達質粒,併經純化得到BMP4目的蛋白,為進一步研究該蛋白的結構和功能奠定基礎.
구건저BMP4기인pET32a-BMP4원핵표체질립,재E.coli중표체병분리순화목적단백.채용PCR기술이pMD18-T-BMP4중조질립위모판확증획득BMP4기인편마성숙태편단,병삽입도원핵표체재체pET32a중,구건원핵표체중조질립pET32a-BMP4.장양성중조질립전화도표체숙주균중,재불동적온도、IPTG농도화시간하진행유도표체,SDS-PAGE분석감정.구건적중조표체질립경PCR、매절화DNA측서감정여예기적결과일치,표체숙주균경IPTG유도표체분자량약위31 ku적융합단백,표체산물점균체총단백적30%이상.성공구건료pET32a-BMP4원핵표체질립,병경순화득도BMP4목적단백,위진일보연구해단백적결구화공능전정기출.
