中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2012年
3期
233-239
,共7页
张玉%白史且%李聪%李达旭%邓永昌
張玉%白史且%李聰%李達旭%鄧永昌
장옥%백사차%리총%리체욱%산영창
绿色荧光蛋白%zeolin基因%载体构建%瞬时表达
綠色熒光蛋白%zeolin基因%載體構建%瞬時錶達
록색형광단백%zeolin기인%재체구건%순시표체
为利用荧光蛋白基因GFP检测外源基因在转基因植株中的表达和定位,构建含有GFP基因的植物表达载体pCB-zeolin-GFP.在目的基因的开放阅读框(ORE)两端设计引物,并引入酶切位点和保护碱基,用PCR方法从pDHA扩增得到zeolin基因的全长,克隆到中间载体pMD18-T,分别用Nco Ⅰ和BglⅡ2种限制性内切酶酶切重组质粒和经过改良的pCAMBIAI1302植物表达载体,经回收、连接、转化、鉴定后,利用基因枪转化法将重组载体转入洋葱表皮细胞,通过共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白在洋葱表皮细胞中的瞬时表达.构建了zeolin基因与绿色荧光蛋白(GFP)融合的植物表达载体pCB-zeolin-GFP,并在洋葱中得到了表达.构建的融合植物表达载体pCB-zeolin-GFP正确,该载体的成功构建为今后进行基因转移、基因功能研究及培育新品种奠定了基础.
為利用熒光蛋白基因GFP檢測外源基因在轉基因植株中的錶達和定位,構建含有GFP基因的植物錶達載體pCB-zeolin-GFP.在目的基因的開放閱讀框(ORE)兩耑設計引物,併引入酶切位點和保護堿基,用PCR方法從pDHA擴增得到zeolin基因的全長,剋隆到中間載體pMD18-T,分彆用Nco Ⅰ和BglⅡ2種限製性內切酶酶切重組質粒和經過改良的pCAMBIAI1302植物錶達載體,經迴收、連接、轉化、鑒定後,利用基因鎗轉化法將重組載體轉入洋蔥錶皮細胞,通過共聚焦顯微鏡檢測綠色熒光蛋白在洋蔥錶皮細胞中的瞬時錶達.構建瞭zeolin基因與綠色熒光蛋白(GFP)融閤的植物錶達載體pCB-zeolin-GFP,併在洋蔥中得到瞭錶達.構建的融閤植物錶達載體pCB-zeolin-GFP正確,該載體的成功構建為今後進行基因轉移、基因功能研究及培育新品種奠定瞭基礎.
위이용형광단백기인GFP검측외원기인재전기인식주중적표체화정위,구건함유GFP기인적식물표체재체pCB-zeolin-GFP.재목적기인적개방열독광(ORE)량단설계인물,병인입매절위점화보호감기,용PCR방법종pDHA확증득도zeolin기인적전장,극륭도중간재체pMD18-T,분별용Nco Ⅰ화BglⅡ2충한제성내절매매절중조질립화경과개량적pCAMBIAI1302식물표체재체,경회수、련접、전화、감정후,이용기인창전화법장중조재체전입양총표피세포,통과공취초현미경검측록색형광단백재양총표피세포중적순시표체.구건료zeolin기인여록색형광단백(GFP)융합적식물표체재체pCB-zeolin-GFP,병재양총중득도료표체.구건적융합식물표체재체pCB-zeolin-GFP정학,해재체적성공구건위금후진행기인전이、기인공능연구급배육신품충전정료기출.
