中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2005年
2期
112-115
,共4页
陈小云%张存帅%关孚时%蒋玉文%冯杉%宋晓晖
陳小雲%張存帥%關孚時%蔣玉文%馮杉%宋曉暉
진소운%장존수%관부시%장옥문%풍삼%송효휘
腐败梭菌%α毒素%分子克隆%核苷酸序列
腐敗梭菌%α毒素%分子剋隆%覈苷痠序列
부패사균%α독소%분자극륭%핵감산서렬
应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从腐败梭菌强毒株C55-1中,扩增出大小为1327bp的腐败梭菌α毒素全基因(csa1327基因),并将其克隆入pMD18-T载体中.转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质粒,PCR和EcoRⅠ/PstⅠ双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆.核苷酸序列分析证实,csa1327基因开放阅读框架由1320bp组成,编码440个氨基酸残基.与GenBank中登录的国外Fukushima 5株、Kagoshima 1株、Mie株和44株的α毒素全基因相比,核苷酸同源率分别为100%、99.47%、99.25%和97.67%,推导氨基酸的同源率分别达100%、100%、99.7%和97.06%.表明本实验所克隆的csa1327基因即为腐败梭菌α毒素基因.
應用聚閤酶鏈式反應(PCR)技術,從腐敗梭菌彊毒株C55-1中,擴增齣大小為1327bp的腐敗梭菌α毒素全基因(csa1327基因),併將其剋隆入pMD18-T載體中.轉化至受體菌DH5α後,經Amp/IPTG/X-Gal選擇培養,提取質粒,PCR和EcoRⅠ/PstⅠ雙酶切鑒定,篩選暘性重組剋隆.覈苷痠序列分析證實,csa1327基因開放閱讀框架由1320bp組成,編碼440箇氨基痠殘基.與GenBank中登錄的國外Fukushima 5株、Kagoshima 1株、Mie株和44株的α毒素全基因相比,覈苷痠同源率分彆為100%、99.47%、99.25%和97.67%,推導氨基痠的同源率分彆達100%、100%、99.7%和97.06%.錶明本實驗所剋隆的csa1327基因即為腐敗梭菌α毒素基因.
응용취합매련식반응(PCR)기술,종부패사균강독주C55-1중,확증출대소위1327bp적부패사균α독소전기인(csa1327기인),병장기극륭입pMD18-T재체중.전화지수체균DH5α후,경Amp/IPTG/X-Gal선택배양,제취질립,PCR화EcoRⅠ/PstⅠ쌍매절감정,사선양성중조극륭.핵감산서렬분석증실,csa1327기인개방열독광가유1320bp조성,편마440개안기산잔기.여GenBank중등록적국외Fukushima 5주、Kagoshima 1주、Mie주화44주적α독소전기인상비,핵감산동원솔분별위100%、99.47%、99.25%화97.67%,추도안기산적동원솔분별체100%、100%、99.7%화97.06%.표명본실험소극륭적csa1327기인즉위부패사균α독소기인.
