免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
1期
5-8,12
,共5页
张君%慕生枝%陈维贤%黄英%黄爱龙%唐霓
張君%慕生枝%陳維賢%黃英%黃愛龍%唐霓
장군%모생지%진유현%황영%황애룡%당예
乙型肝炎病毒%PreS1基因%原核表达
乙型肝炎病毒%PreS1基因%原覈錶達
을형간염병독%PreS1기인%원핵표체
目的 构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体,获得高纯度、有生物活性的PreS1重组蛋白.方法 采用PCR法扩增PreS1及其N末端和C末端部分基因序列,克隆入原核表达载体pGST-MOLUC.重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测.用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶亲和层析纯化的重组融合蛋白免疫新西兰家兔,制备GST-PreS1融合蛋白的抗血清.进一步用ELISA分析融合蛋白特异抑制HBV病毒与抗体结合的能力.结果 重组质粒转化宿主菌后成功诱导出Mr39 000、31 000和32 000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融合蛋白,均与预期相对分子质量相符.Western blot检测获得特异的杂交条带.采用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶纯化的融合蛋白纯度约为90%左右.融合蛋白免疫家兔后抗体滴度达到10-7.病毒捕获ELISA实验表明,融合蛋白能特异抑制病毒与家兔免疫血清结合.结论 GST-PreS1融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,其纯化产物是研究PreS1基因在HBV感染过程中作用的有用工具.
目的 構建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原覈錶達載體,穫得高純度、有生物活性的PreS1重組蛋白.方法 採用PCR法擴增PreS1及其N末耑和C末耑部分基因序列,剋隆入原覈錶達載體pGST-MOLUC.重組質粒經IPTG誘導錶達後進行SDS-PAGE電泳分析和Western blot檢測.用穀胱甘肽-Sepharose 4B凝膠親和層析純化的重組融閤蛋白免疫新西蘭傢兔,製備GST-PreS1融閤蛋白的抗血清.進一步用ELISA分析融閤蛋白特異抑製HBV病毒與抗體結閤的能力.結果 重組質粒轉化宿主菌後成功誘導齣Mr39 000、31 000和32 000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融閤蛋白,均與預期相對分子質量相符.Western blot檢測穫得特異的雜交條帶.採用穀胱甘肽-Sepharose 4B凝膠純化的融閤蛋白純度約為90%左右.融閤蛋白免疫傢兔後抗體滴度達到10-7.病毒捕穫ELISA實驗錶明,融閤蛋白能特異抑製病毒與傢兔免疫血清結閤.結論 GST-PreS1融閤蛋白能夠在大腸桿菌中高效錶達,其純化產物是研究PreS1基因在HBV感染過程中作用的有用工具.
목적 구건함을형간염병독(HBV)PreS1기인적원핵표체재체,획득고순도、유생물활성적PreS1중조단백.방법 채용PCR법확증PreS1급기N말단화C말단부분기인서렬,극륭입원핵표체재체pGST-MOLUC.중조질립경IPTG유도표체후진행SDS-PAGE전영분석화Western blot검측.용곡광감태-Sepharose 4B응효친화층석순화적중조융합단백면역신서란가토,제비GST-PreS1융합단백적항혈청.진일보용ELISA분석융합단백특이억제HBV병독여항체결합적능력.결과 중조질립전화숙주균후성공유도출Mr39 000、31 000화32 000적GST-PreS1、GST-PreS1N급GST-PreS1C융합단백,균여예기상대분자질량상부.Western blot검측획득특이적잡교조대.채용곡광감태-Sepharose 4B응효순화적융합단백순도약위90%좌우.융합단백면역가토후항체적도체도10-7.병독포획ELISA실험표명,융합단백능특이억제병독여가토면역혈청결합.결론 GST-PreS1융합단백능구재대장간균중고효표체,기순화산물시연구PreS1기인재HBV감염과정중작용적유용공구.
