细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
3期
217-219,222
,共4页
李金福%陈建平%杨志伟%田玉%马莹%胡孝素
李金福%陳建平%楊誌偉%田玉%馬瑩%鬍孝素
리금복%진건평%양지위%전옥%마형%호효소
杜氏利什曼原虫%无鞭毛体蛋白基因%体外表达
杜氏利什曼原蟲%無鞭毛體蛋白基因%體外錶達
두씨리십만원충%무편모체단백기인%체외표체
目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin, 并研究其在NIH3T3细胞中的表达.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增.将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中, 构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin.以pcDNA3.1-amastin转染NIH3T3细胞, 采用免疫荧光染色法和RT-PCR分别鉴定pcDNA3.1-amastin的瞬时表达和稳定表达.结果:在细胞膜和细胞内均观察到较强的绿色荧光, 表明pcDNA3.1-amastin成功地转入NIH3T3细胞, 并在细胞膜和细胞内获得短暂表达.稳定转染的NIH3T3细胞的总RNA经反转录后, 用PCR扩增出无鞭毛体蛋白基因, 表明获得了稳定表达.结论:成功地构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的真核表达重组质粒, 并且该基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达.
目的:構建杜氏利什曼原蟲無鞭毛體蛋白(amastin)編碼基因的真覈錶達重組質粒pcDNA3.1-amastin, 併研究其在NIH3T3細胞中的錶達.方法:提取杜氏利什曼原蟲基因組DNA進行PCR擴增.將擴增的無鞭毛體蛋白基因片段導入質粒pcDNA3.1(+)中, 構建真覈錶達重組質粒pcDNA3.1-amastin.以pcDNA3.1-amastin轉染NIH3T3細胞, 採用免疫熒光染色法和RT-PCR分彆鑒定pcDNA3.1-amastin的瞬時錶達和穩定錶達.結果:在細胞膜和細胞內均觀察到較彊的綠色熒光, 錶明pcDNA3.1-amastin成功地轉入NIH3T3細胞, 併在細胞膜和細胞內穫得短暫錶達.穩定轉染的NIH3T3細胞的總RNA經反轉錄後, 用PCR擴增齣無鞭毛體蛋白基因, 錶明穫得瞭穩定錶達.結論:成功地構建杜氏利什曼原蟲無鞭毛體蛋白基因的真覈錶達重組質粒, 併且該基因在NIH3T3細胞中穫得瞭穩定錶達.
목적:구건두씨리십만원충무편모체단백(amastin)편마기인적진핵표체중조질립pcDNA3.1-amastin, 병연구기재NIH3T3세포중적표체.방법:제취두씨리십만원충기인조DNA진행PCR확증.장확증적무편모체단백기인편단도입질립pcDNA3.1(+)중, 구건진핵표체중조질립pcDNA3.1-amastin.이pcDNA3.1-amastin전염NIH3T3세포, 채용면역형광염색법화RT-PCR분별감정pcDNA3.1-amastin적순시표체화은정표체.결과:재세포막화세포내균관찰도교강적록색형광, 표명pcDNA3.1-amastin성공지전입NIH3T3세포, 병재세포막화세포내획득단잠표체.은정전염적NIH3T3세포적총RNA경반전록후, 용PCR확증출무편모체단백기인, 표명획득료은정표체.결론:성공지구건두씨리십만원충무편모체단백기인적진핵표체중조질립, 병차해기인재NIH3T3세포중획득료은정표체.
