CAJ | 학술논문

背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞存组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要.目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2005-08/12在暨南大学完成.材料:SPF级3月龄SD雌性大鼠5只,由中山大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下分离大鼠双下肢,低糖DMEM培养液冲出骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞.利用差速贴肇原理对细胞进行纯化扩增.取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,培养14d.主要观察指标:倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,采用碱性磷酸酶染色鉴定成骨能力,以油红○染色鉴定成脂能力,以甲苯胺蓝染色鉴定成软骨能力.结果:与密度梯度离心法相比,全骨髓贴肇法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化.第3代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,不表达造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45,表达整合索家族成员CD29和黏附分子CD44,经诱导后碱性磷酸酶染色、油红○染色和甲苯胺蓝染色均呈阳性.结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓间充质干细胞,效果优于密度梯度离心法.经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为大鼠骨髓间充质干细胞.
배경:골수간충질간세포작위충자세포존조직공정등영역응용엄범,건립은정적분리배양체계화통일감정표준우위중요.목적:이불동방법체외분리배양대서골수간충질간세포,병진행세포형태학관찰、표면표지물감정급다향분화능력검측.설계、시간급지점:세포학체외대비관찰,우2005-08/12재기남대학완성.재료:SPF급3월령SD자성대서5지,유중산대학실험동물중심제공.방법:무균조건하분리대서쌍하지,저당DMEM배양액충출골수,분별운용전골수첩벽법화밀도제도리심법체외분리골수간충질간세포.이용차속첩조원리대세포진행순화확증.취생장상태량호적제3대골수간충질간세포,분별가입성골、성지、성연골유도배양기,배양14d.주요관찰지표:도치상차현미경하관찰골수간충질간세포적생장상태,류식세포의검측세포표면표지물적표체,채용감성린산매염색감정성골능력,이유홍○염색감정성지능력,이갑분알람염색감정성연골능력.결과:여밀도제도리심법상비,전골수첩조법분리획득적골수간충질간세포첩벽시간단,증식쾌,경전대후능구순화.제3대골수간충질간세포형태단일균균,정전형적겁성선와상생장,불표체조혈전체세포표지항원CD34화백세포표지항원CD45,표체정합색가족성원CD29화점부분자CD44,경유도후감성린산매염색、유홍○염색화갑분알람염색균정양성.결론:채용전골수첩벽법가은정획득균질성량호적대서골수간충질간세포,효과우우밀도제도리심법.경전골수첩벽법체외분리배양적세포재형태학、세포표면표지물표체화다향분화능력방면구유간세포생물학특성,경감정위대서골수간충질간세포.