浙江师范大学学报（自然科学版）
浙江師範大學學報（自然科學版）
절강사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2011年
3期
333-338
,共6页
氧化还原因子-1%融合蛋白%原核表达%亲和色谱法
氧化還原因子-1%融閤蛋白%原覈錶達%親和色譜法
양화환원인자-1%융합단백%원핵표체%친화색보법
为建立氧化还原因子-1（Ref-1）的原核表达系统,将经过酶切后的人源Ref-1编码片段定向克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了pGEX-4T-3/Ref-1原核表达载体,重组质粒转化至BL21(DE3)工程菌,异丙基.-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组工程菌表达可溶性融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B（Glutathione Sepharose 4B）亲和纯化重组蛋白,透析后用聚乙二醇8000( PEG8000)浓缩,获得纯度达92％的融合蛋白,产率为3.7mg/L,融合蛋白占菌体总蛋白的6.8％.蛋白质印迹(Western blot)显示该蛋白可以被抗体特异性识别,证实其为GST-Ref-1融合蛋白.GST-Ref-1蛋白体外增强了激活蛋白-1(AP-1)的DNA结合能力,并能拮抗H2O2造成的AP-1氧化损伤.
為建立氧化還原因子-1（Ref-1）的原覈錶達繫統,將經過酶切後的人源Ref-1編碼片段定嚮剋隆到pGEX-4T-3載體上,構建瞭pGEX-4T-3/Ref-1原覈錶達載體,重組質粒轉化至BL21(DE3)工程菌,異丙基.-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導重組工程菌錶達可溶性融閤蛋白,穀胱甘肽瓊脂糖凝膠4B（Glutathione Sepharose 4B）親和純化重組蛋白,透析後用聚乙二醇8000( PEG8000)濃縮,穫得純度達92％的融閤蛋白,產率為3.7mg/L,融閤蛋白佔菌體總蛋白的6.8％.蛋白質印跡(Western blot)顯示該蛋白可以被抗體特異性識彆,證實其為GST-Ref-1融閤蛋白.GST-Ref-1蛋白體外增彊瞭激活蛋白-1(AP-1)的DNA結閤能力,併能拮抗H2O2造成的AP-1氧化損傷.
위건립양화환원인자-1（Ref-1）적원핵표체계통,장경과매절후적인원Ref-1편마편단정향극륭도pGEX-4T-3재체상,구건료pGEX-4T-3/Ref-1원핵표체재체,중조질립전화지BL21(DE3)공정균,이병기.-β-D- 류대필남반유당감(IPTG)유도중조공정균표체가용성융합단백,곡광감태경지당응효4B（Glutathione Sepharose 4B）친화순화중조단백,투석후용취을이순8000( PEG8000)농축,획득순도체92％적융합단백,산솔위3.7mg/L,융합단백점균체총단백적6.8％.단백질인적(Western blot)현시해단백가이피항체특이성식별,증실기위GST-Ref-1융합단백.GST-Ref-1단백체외증강료격활단백-1(AP-1)적DNA결합능력,병능길항H2O2조성적AP-1양화손상.
