浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2011年
6期
582-587
,共6页
肝炎病毒属/遗传学%RNA,小分子干扰/遗传学%丙型肝炎%RNA干扰%小干扰RNA(siRNA)%HCV复制%NS5B%感染细胞
肝炎病毒屬/遺傳學%RNA,小分子榦擾/遺傳學%丙型肝炎%RNA榦擾%小榦擾RNA(siRNA)%HCV複製%NS5B%感染細胞
간염병독속/유전학%RNA,소분자간우/유전학%병형간염%RNA간우%소간우RNA(siRNA)%HCV복제%NS5B%감염세포
目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制.方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达.将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平.结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达.40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58％、54％、29％、17％、17％、33％、22％、19％,明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P＞0.05).结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活.
目的:探討siRNA能否有效抑製丙型肝炎病毒(HCV)感染細胞中HCV的複製.方法:用HCV JC1質粒體外製備HCV RNA轉錄體,轉染Huh-7.5.1細胞,收集細胞上清,再次孵育Huh-7.5.1細胞以建立HCV感染細胞模型,併用間接免疫熒光檢測細胞內HCV覈心蛋白的錶達.將針對HCV NS5B基因的siRNA轉染HCV感染細胞(濃度為4、40和200 nmol/L,時間為24 h、48 h和72 h),將4、40和200 nmol/L siRNA轉染正常Huh-7.5.1細胞,併設空白對照、脂質體對照、無關siRNA對照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)組,用熒光定量PCR檢測細胞內HCV RNA和PKRmRNA水平.結果:HCV感染的Huh-7.5.1細胞中檢測齣HCV覈心蛋白錶達.40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h組及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h組,HCV RNA水平分彆降至58％、54％、29％、17％、17％、33％、22％、19％,明顯低于對照組(P＜0.05或P＜0.01).1 000 IU/mlIFN的各時間組HCV RNA水平均明顯低于對照組(P＜0.05或P＜0.01).各濃度siRNA組的PKR mRNA的錶達與對照組無明顯差異(P＞0.05).結論:針對HCV NS5B區的siRNA能夠明顯抑製HCV感染細胞中HCV的複製,而不引起雙鏈RNA依賴的蛋白激酶(PKR)基因錶達的激活.
목적:탐토siRNA능부유효억제병형간염병독(HCV)감염세포중HCV적복제.방법:용HCV JC1질립체외제비HCV RNA전록체,전염Huh-7.5.1세포,수집세포상청,재차부육Huh-7.5.1세포이건립HCV감염세포모형,병용간접면역형광검측세포내HCV핵심단백적표체.장침대HCV NS5B기인적siRNA전염HCV감염세포(농도위4、40화200 nmol/L,시간위24 h、48 h화72 h),장4、40화200 nmol/L siRNA전염정상Huh-7.5.1세포,병설공백대조、지질체대조、무관siRNA대조이급IFNα-2b(1 000 IU/ml)조,용형광정량PCR검측세포내HCV RNA화PKRmRNA수평.결과:HCV감염적Huh-7.5.1세포중검측출HCV핵심단백표체.40 nmol화200nmol/L siRNA 24 h조급4、40、200 nmol/L siRNA 48 h화72 h조,HCV RNA수평분별강지58％、54％、29％、17％、17％、33％、22％、19％,명현저우대조조(P＜0.05혹P＜0.01).1 000 IU/mlIFN적각시간조HCV RNA수평균명현저우대조조(P＜0.05혹P＜0.01).각농도siRNA조적PKR mRNA적표체여대조조무명현차이(P＞0.05).결론:침대HCV NS5B구적siRNA능구명현억제HCV감염세포중HCV적복제,이불인기쌍련RNA의뢰적단백격매(PKR)기인표체적격활.
