中国癌症防治杂志
中國癌癥防治雜誌
중국암증방치잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY PREVENTION AND TREATMENT
2011年
4期
271-276
,共6页
尹巧云%李力%于红静%王琪
尹巧雲%李力%于紅靜%王琪
윤교운%리력%우홍정%왕기
慢病毒%小分子蛋白%卵巢癌
慢病毒%小分子蛋白%卵巢癌
만병독%소분자단백%란소암
目的 构建趋化因子蛋白慢病毒表达系统,建立稳定表达GFP的卵巢癌细胞系,为研究趋化因子蛋白的功能及作用机制打下基础.方法 趋化因子CCL18、IL-8、CXCL1基因克隆质粒经PCR扩增、酶切,与慢病毒载体PWPI连接,构建的重组慢病毒质粒按比例与包膜质粒PCMV-dR 8.74及包装质粒PMD2.G混合,LipofectinTM2000共转染293T细胞系包装病毒颗粒,病毒液感染卵巢癌SKOV3细胞后,采用流式细胞仪分选出GFP表达的细胞作为转染成功的细胞.实时荧光定量PCR验证转染后目的基因的表达,Western blot验证目的蛋白的表达.结果 重组慢病毒基因能高效地转导入靶细胞,转导效率达95％以上,并稳定表达；实时荧光定量PCR检测结果显示:细胞和组织中转染目的基因组与对照组比较,均见目的基因的表达显著增高(P＜0.05)；Western blot验证转染目的基因组小分子蛋白成功表达.结论 本实验成功构建了小分子蛋白慢病毒表达系统,为进一步研究小分子蛋白在人体的功能及作用机制建立了实验基础.
目的 構建趨化因子蛋白慢病毒錶達繫統,建立穩定錶達GFP的卵巢癌細胞繫,為研究趨化因子蛋白的功能及作用機製打下基礎.方法 趨化因子CCL18、IL-8、CXCL1基因剋隆質粒經PCR擴增、酶切,與慢病毒載體PWPI連接,構建的重組慢病毒質粒按比例與包膜質粒PCMV-dR 8.74及包裝質粒PMD2.G混閤,LipofectinTM2000共轉染293T細胞繫包裝病毒顆粒,病毒液感染卵巢癌SKOV3細胞後,採用流式細胞儀分選齣GFP錶達的細胞作為轉染成功的細胞.實時熒光定量PCR驗證轉染後目的基因的錶達,Western blot驗證目的蛋白的錶達.結果 重組慢病毒基因能高效地轉導入靶細胞,轉導效率達95％以上,併穩定錶達；實時熒光定量PCR檢測結果顯示:細胞和組織中轉染目的基因組與對照組比較,均見目的基因的錶達顯著增高(P＜0.05)；Western blot驗證轉染目的基因組小分子蛋白成功錶達.結論 本實驗成功構建瞭小分子蛋白慢病毒錶達繫統,為進一步研究小分子蛋白在人體的功能及作用機製建立瞭實驗基礎.
목적 구건추화인자단백만병독표체계통,건립은정표체GFP적란소암세포계,위연구추화인자단백적공능급작용궤제타하기출.방법 추화인자CCL18、IL-8、CXCL1기인극륭질립경PCR확증、매절,여만병독재체PWPI련접,구건적중조만병독질립안비례여포막질립PCMV-dR 8.74급포장질립PMD2.G혼합,LipofectinTM2000공전염293T세포계포장병독과립,병독액감염란소암SKOV3세포후,채용류식세포의분선출GFP표체적세포작위전염성공적세포.실시형광정량PCR험증전염후목적기인적표체,Western blot험증목적단백적표체.결과 중조만병독기인능고효지전도입파세포,전도효솔체95％이상,병은정표체；실시형광정량PCR검측결과현시:세포화조직중전염목적기인조여대조조비교,균견목적기인적표체현저증고(P＜0.05)；Western blot험증전염목적기인조소분자단백성공표체.결론 본실험성공구건료소분자단백만병독표체계통,위진일보연구소분자단백재인체적공능급작용궤제건립료실험기출.
