CAJ | 학술논문

目的建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞(EPC)的方法,并对EPC多种表面标志物进行鉴定.方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞,应用专门培养基EGM-2培养.观察不同时期细胞增殖情况；在培养7d后行DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定及流式细胞检测；应用RT-PCR分析0,4,7d时CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、VE-Cad等表面标志物的表达情况.结果诱导培养的骨髓单个核细胞72 h后基本完成贴壁,8～9 d时贴壁70％～80％可进行传代,2～3周后呈典型的鹅卵石样外观.细胞培养7d后DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞比例为(90.16±6.77)％,流式细胞检测PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34均阳性概率为(1.73±0.27)％.RT-PCR结果显示随时间推移CD34、CD117、CD133的表达量逐渐下降,而CD31、FLK-1、VE-Cad等内皮系标志物的表达逐渐增加.结论密度梯度离心法结合定向诱导培养可获得较多数量的EPC,以流式细胞检测技术为主,结合细胞形态学和功能学对EPC进行鉴定是一种较为理想的方法.
목적 건립일충종소서골수중분리、배양내피조세포(EPC)적방법,병대EPC다충표면표지물진행감정.방법 밀도제도리심법획취소서골수원성단개핵세포,응용전문배양기EGM-2배양.관찰불동시기세포증식정황；재배양7d후행DIL-AC-LDL화FITC-UEA-1쌍형광염색감정급류식세포검측；응용RT-PCR분석0,4,7d시CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、VE-Cad등표면표지물적표체정황.결과 유도배양적골수단개핵세포72 h후기본완성첩벽,8～9 d시첩벽70％～80％가진행전대,2～3주후정전형적아란석양외관.세포배양7d후DIL-AC-LDL화FITC-UEA-1쌍염색양성세포비례위(90.16±6.77)％,류식세포검측PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34균양성개솔위(1.73±0.27)％.RT-PCR결과현시수시간추이CD34、CD117、CD133적표체량축점하강,이CD31、FLK-1、VE-Cad등내피계표지물적표체축점증가.결론 밀도제도리심법결합정향유도배양가획득교다수량적EPC,이류식세포검측기술위주,결합세포형태학화공능학대EPC진행감정시일충교위이상적방법.