眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2010年
12期
1144-1149
,共6页
王应利%郭斌%惠延年%郭纯刚%李冬%凌宇
王應利%郭斌%惠延年%郭純剛%李鼕%凌宇
왕응리%곽빈%혜연년%곽순강%리동%릉우
周细胞%视网膜微血管内皮细胞%共培养%增生%缺氧
週細胞%視網膜微血管內皮細胞%共培養%增生%缺氧
주세포%시망막미혈관내피세포%공배양%증생%결양
目的 探讨视网膜微血管内皮细胞(RMECs)与共培养的周细胞(PCs)及PCs条件培养液(PCM)对常氧和缺氧条件下RMECs增生的影响.方法 传代培养大鼠RMECs和PCs,采用兔抗鼠Ⅷ因子多克隆抗体和小鼠抗大鼠CD31单克隆抗体免疫组织化学法鉴定RMECs,PCs采用小鼠抗大鼠desmin多克隆抗体和兔抗鼠抗血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)进行免疫荧光双标鉴定.Millicell小室建立PCs和RMECs共培养系统,PCs培养近融合期后制备PCM,向共培养系统或PCM中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2诱导形成细胞化学缺氧模型,观察常氧和缺氧条件下PCs和PCM对RMECs增生的影响.使用MTT法、3H-TdR掺入法检测RMECs在不同培养条件下的增生数量,并用流式细胞仪检测RMECs在不同细胞周期的细胞率.结果 近融合期的RMECs呈类纺锤状、单层生长,可见明显的接触抑制,Ⅷ因子和CD31均阳性表达.PCs形状不规则,细胞重叠生长无接触抑制,PDGFR-β和desmin抗体双标阳性.缺氧3～9d缺氧RMECs单独培养组较常氧RMECs单独培养组各时间点的RMECs均明显增生,缺氧6d时增生达高峰(P＜0.01),细胞生长抑制率(GIR)为-24.9%.缺氧共培养组较缺氧RMECs单独培养组RMECs增生下降(P＜0.05).缺氧3、6、9d时常氧共培养组较常氧RMECs单独培养组RMECs数目均明显下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).缺氧6d时S期RMECs数量明显增加,占各期细胞总数的(43.9±0.8)%;常氧或缺氧共培养组,PCs均可抑制RMECs的增生,S期细胞分别占各期细胞总数的(3.6±0.1)%、(15.1±0.9)%(P＜0.05,P＜ 0.01).常氧PCM组RMECs的吸光度(A)值和3H-TdR掺入量4～24h均低于对照组(P＜0.05).结论 缺氧和常氧条件下RMECs和PCs共培养时PCs均可抑制RMECs的增生,常氧条件下PCM可抑制RMECs的增生.
目的 探討視網膜微血管內皮細胞(RMECs)與共培養的週細胞(PCs)及PCs條件培養液(PCM)對常氧和缺氧條件下RMECs增生的影響.方法 傳代培養大鼠RMECs和PCs,採用兔抗鼠Ⅷ因子多剋隆抗體和小鼠抗大鼠CD31單剋隆抗體免疫組織化學法鑒定RMECs,PCs採用小鼠抗大鼠desmin多剋隆抗體和兔抗鼠抗血小闆衍生生長因子受體-β(PDGFR-β)進行免疫熒光雙標鑒定.Millicell小室建立PCs和RMECs共培養繫統,PCs培養近融閤期後製備PCM,嚮共培養繫統或PCM中加入終濃度為200μmol/L的CoCl2誘導形成細胞化學缺氧模型,觀察常氧和缺氧條件下PCs和PCM對RMECs增生的影響.使用MTT法、3H-TdR摻入法檢測RMECs在不同培養條件下的增生數量,併用流式細胞儀檢測RMECs在不同細胞週期的細胞率.結果 近融閤期的RMECs呈類紡錘狀、單層生長,可見明顯的接觸抑製,Ⅷ因子和CD31均暘性錶達.PCs形狀不規則,細胞重疊生長無接觸抑製,PDGFR-β和desmin抗體雙標暘性.缺氧3～9d缺氧RMECs單獨培養組較常氧RMECs單獨培養組各時間點的RMECs均明顯增生,缺氧6d時增生達高峰(P＜0.01),細胞生長抑製率(GIR)為-24.9%.缺氧共培養組較缺氧RMECs單獨培養組RMECs增生下降(P＜0.05).缺氧3、6、9d時常氧共培養組較常氧RMECs單獨培養組RMECs數目均明顯下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).缺氧6d時S期RMECs數量明顯增加,佔各期細胞總數的(43.9±0.8)%;常氧或缺氧共培養組,PCs均可抑製RMECs的增生,S期細胞分彆佔各期細胞總數的(3.6±0.1)%、(15.1±0.9)%(P＜0.05,P＜ 0.01).常氧PCM組RMECs的吸光度(A)值和3H-TdR摻入量4～24h均低于對照組(P＜0.05).結論 缺氧和常氧條件下RMECs和PCs共培養時PCs均可抑製RMECs的增生,常氧條件下PCM可抑製RMECs的增生.
목적 탐토시망막미혈관내피세포(RMECs)여공배양적주세포(PCs)급PCs조건배양액(PCM)대상양화결양조건하RMECs증생적영향.방법 전대배양대서RMECs화PCs,채용토항서Ⅷ인자다극륭항체화소서항대서CD31단극륭항체면역조직화학법감정RMECs,PCs채용소서항대서desmin다극륭항체화토항서항혈소판연생생장인자수체-β(PDGFR-β)진행면역형광쌍표감정.Millicell소실건립PCs화RMECs공배양계통,PCs배양근융합기후제비PCM,향공배양계통혹PCM중가입종농도위200μmol/L적CoCl2유도형성세포화학결양모형,관찰상양화결양조건하PCs화PCM대RMECs증생적영향.사용MTT법、3H-TdR참입법검측RMECs재불동배양조건하적증생수량,병용류식세포의검측RMECs재불동세포주기적세포솔.결과 근융합기적RMECs정류방추상、단층생장,가견명현적접촉억제,Ⅷ인자화CD31균양성표체.PCs형상불규칙,세포중첩생장무접촉억제,PDGFR-β화desmin항체쌍표양성.결양3～9d결양RMECs단독배양조교상양RMECs단독배양조각시간점적RMECs균명현증생,결양6d시증생체고봉(P＜0.01),세포생장억제솔(GIR)위-24.9%.결양공배양조교결양RMECs단독배양조RMECs증생하강(P＜0.05).결양3、6、9d시상양공배양조교상양RMECs단독배양조RMECs수목균명현하강(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).결양6d시S기RMECs수량명현증가,점각기세포총수적(43.9±0.8)%;상양혹결양공배양조,PCs균가억제RMECs적증생,S기세포분별점각기세포총수적(3.6±0.1)%、(15.1±0.9)%(P＜0.05,P＜ 0.01).상양PCM조RMECs적흡광도(A)치화3H-TdR참입량4～24h균저우대조조(P＜0.05).결론 결양화상양조건하RMECs화PCs공배양시PCs균가억제RMECs적증생,상양조건하PCM가억제RMECs적증생.
