CAJ | 학술논문

目的:观察体外培养的内皮前体细胞自体移植后在缺血肢体新血管形成和改善血液灌注过程中的形态学变化及其作用.方法:①实验于2002-08/2003-04在解放军总医院心内科实验室完成.选用成年雄性新西兰白兔20只.随机将动物分为2组,分别为细胞移植组和对照组(肌肉注射磷酸盐缓冲液1 mL),各10只.实验2个时间点3,5周各5只.②细胞移植组兔抽取骨髓,分离单个核细胞,采用内皮细胞专用培养基(添加体积分数0.2胎牛血清,肝素1×104 U/L和青霉素1×105 U/L)体外培养扩增内皮前体细胞并给予鉴定.细胞移植组动物肌肉注射内皮前体细胞悬液,移植细胞数量为(7.4±1.7)×106,共注射5个点.③分别饲养3和5周后行激光多普勒灌注显像显示缺血肢体血液灌注情况;行腹主动脉造影计数右侧大腿自腹股沟韧带至膝关节的血流时间,以股骨中点的垂直线为标准,计数侧支血管数目;行组织学和免疫组织化学检测观察缺血肌肉组织标记细胞是否整合至血管壁内.④采用t检验比较计量资料间差异.结果:①内皮前体细胞贴壁后呈纺锤体形,原代细胞呈集落生长,生长速度较慢,传代以后分布较均匀,生长迅速.原代细胞培养时可见较多杂细胞存在,但传代2次以后细胞形态非常单一.I型荆豆凝集素、乙酰化低密度脂蛋白和抗Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体鉴定均为阳性,细胞纯度达100%.②内皮前体细胞移植后3周,激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组缺血肢体血液灌注显著改善(t=5.96,P＜0.01),血管造影显示细胞移植组侧支血管生成增多(t=5.28,＜0.01),血流速度增快(t=-6.85,P＜0.01).细胞移植后5周,切开动物缺血肢体皮肤发现,细胞移植组皮肤、皮下组织和肌肉基本不形成粘连,而对照组粘连严重,此时激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组和对照组血液灌注检测无显著差别(P＞0.05),但造影检测显示细胞移植组侧支血管数目明显多于对照组,血流时间明显短于对照组(t=3.32,-4.62,P＜0.01).③组织学检测显示对照组缺血肢体存在肌肉坏死现象,同时有大量炎细胞浸润,而细胞移植组未见未见肌肉坏死和炎细胞浸润,细胞追踪显示大量标记的细胞整合至血管壁内形成内皮细胞.结论:①骨髓中的内皮前体细胞可以在体外大量扩增,从而达到满足自体移植的需要.②内皮前体细胞自体移植后可以参与新血管形成,进而形成侧支血管,有效改善缺血组织的血液灌注. 目的:觀察體外培養的內皮前體細胞自體移植後在缺血肢體新血管形成和改善血液灌註過程中的形態學變化及其作用.方法:①實驗于2002-08/2003-04在解放軍總醫院心內科實驗室完成.選用成年雄性新西蘭白兔20隻.隨機將動物分為2組,分彆為細胞移植組和對照組(肌肉註射燐痠鹽緩遲液1 mL),各10隻.實驗2箇時間點3,5週各5隻.②細胞移植組兔抽取骨髓,分離單箇覈細胞,採用內皮細胞專用培養基(添加體積分數0.2胎牛血清,肝素1×104 U/L和青黴素1×105 U/L)體外培養擴增內皮前體細胞併給予鑒定.細胞移植組動物肌肉註射內皮前體細胞懸液,移植細胞數量為(7.4±1.7)×106,共註射5箇點.③分彆飼養3和5週後行激光多普勒灌註顯像顯示缺血肢體血液灌註情況;行腹主動脈造影計數右側大腿自腹股溝韌帶至膝關節的血流時間,以股骨中點的垂直線為標準,計數側支血管數目;行組織學和免疫組織化學檢測觀察缺血肌肉組織標記細胞是否整閤至血管壁內.④採用t檢驗比較計量資料間差異.結果:①內皮前體細胞貼壁後呈紡錘體形,原代細胞呈集落生長,生長速度較慢,傳代以後分佈較均勻,生長迅速.原代細胞培養時可見較多雜細胞存在,但傳代2次以後細胞形態非常單一.I型荊豆凝集素、乙酰化低密度脂蛋白和抗Ⅷ因子相關抗原單剋隆抗體鑒定均為暘性,細胞純度達100%.②內皮前體細胞移植後3週,激光多普勒灌註顯像檢測顯示細胞移植組缺血肢體血液灌註顯著改善(t=5.96,P＜0.01),血管造影顯示細胞移植組側支血管生成增多(t=5.28,＜0.01),血流速度增快(t=-6.85,P＜0.01).細胞移植後5週,切開動物缺血肢體皮膚髮現,細胞移植組皮膚、皮下組織和肌肉基本不形成粘連,而對照組粘連嚴重,此時激光多普勒灌註顯像檢測顯示細胞移植組和對照組血液灌註檢測無顯著差彆(P＞0.05),但造影檢測顯示細胞移植組側支血管數目明顯多于對照組,血流時間明顯短于對照組(t=3.32,-4.62,P＜0.01).③組織學檢測顯示對照組缺血肢體存在肌肉壞死現象,同時有大量炎細胞浸潤,而細胞移植組未見未見肌肉壞死和炎細胞浸潤,細胞追蹤顯示大量標記的細胞整閤至血管壁內形成內皮細胞.結論:①骨髓中的內皮前體細胞可以在體外大量擴增,從而達到滿足自體移植的需要.②內皮前體細胞自體移植後可以參與新血管形成,進而形成側支血管,有效改善缺血組織的血液灌註.
목적:관찰체외배양적내피전체세포자체이식후재결혈지체신혈관형성화개선혈액관주과정중적형태학변화급기작용.방법:①실험우2002-08/2003-04재해방군총의원심내과실험실완성.선용성년웅성신서란백토20지.수궤장동물분위2조,분별위세포이식조화대조조(기육주사린산염완충액1 mL),각10지.실험2개시간점3,5주각5지.②세포이식조토추취골수,분리단개핵세포,채용내피세포전용배양기(첨가체적분수0.2태우혈청,간소1×104 U/L화청매소1×105 U/L)체외배양확증내피전체세포병급여감정.세포이식조동물기육주사내피전체세포현액,이식세포수량위(7.4±1.7)×106,공주사5개점.③분별사양3화5주후행격광다보륵관주현상현시결혈지체혈액관주정황;행복주동맥조영계수우측대퇴자복고구인대지슬관절적혈류시간,이고골중점적수직선위표준,계수측지혈관수목;행조직학화면역조직화학검측관찰결혈기육조직표기세포시부정합지혈관벽내.④채용t검험비교계량자료간차이.결과:①내피전체세포첩벽후정방추체형,원대세포정집락생장,생장속도교만,전대이후분포교균균,생장신속.원대세포배양시가견교다잡세포존재,단전대2차이후세포형태비상단일.I형형두응집소、을선화저밀도지단백화항Ⅷ인자상관항원단극륭항체감정균위양성,세포순도체100%.②내피전체세포이식후3주,격광다보륵관주현상검측현시세포이식조결혈지체혈액관주현저개선(t=5.96,P＜0.01),혈관조영현시세포이식조측지혈관생성증다(t=5.28,＜0.01),혈류속도증쾌(t=-6.85,P＜0.01).세포이식후5주,절개동물결혈지체피부발현,세포이식조피부、피하조직화기육기본불형성점련,이대조조점련엄중,차시격광다보륵관주현상검측현시세포이식조화대조조혈액관주검측무현저차별(P＞0.05),단조영검측현시세포이식조측지혈관수목명현다우대조조,혈류시간명현단우대조조(t=3.32,-4.62,P＜0.01).③조직학검측현시대조조결혈지체존재기육배사현상,동시유대량염세포침윤,이세포이식조미견미견기육배사화염세포침윤,세포추종현시대량표기적세포정합지혈관벽내형성내피세포.결론:①골수중적내피전체세포가이재체외대량확증,종이체도만족자체이식적수요.②내피전체세포자체이식후가이삼여신혈관형성,진이형성측지혈관,유효개선결혈조직적혈액관주.